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公开(公告)号：CN113699137A
公开(公告)日：2021-11-26
申请号：CN202111033981.6
申请日：2021-09-03
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
摘要： 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种黄芪甲苷木糖苷酶突变体及其应用，所述突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列突变得到；所述突变的位点包括第202位、第322位、第372和第548位中的一种或多种。本发明中的黄芪甲苷木糖苷酶突变体通过4个位点的单点突变或组合突变，能够显著提高酶水解黄芪甲苷C3位置木糖苷键的水解活性，相较于野生型黄芪甲苷木糖苷酶，对底物黄芪甲苷的催化活性提高了1～20倍，大幅降低环黄芪醇工业生产的成本，使酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的生产效率显著提高。
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公开(公告)号：CN111849959B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202010817008.2
申请日：2020-08-14
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
摘要： 本发明属于催化技术领域，本发明提供了一种利用共固定双酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，包括如下步骤：将β‑葡萄糖苷酶、磷酸盐缓冲溶液、Fe3O4溶液、氯化铜溶液、木糖苷酶进行反应，得到共固定双酶；用共固定双酶和黄芪甲苷进行催化反应，得到环黄芪醇。本发明的方法克服了现有技术采用两步反应制备环黄芪醇工艺中中间体的提取分离问题，同时本发明的共固定双酶可以回收再利用，降低了生产成本，工艺简单，经济节约，非常适合于大规模工业化生产。本发明的共固定双酶对黄芪甲苷的转化率基本达到100％，底物黄芪甲苷完全转化成环黄芪醇。本发明得到的环黄芪醇的产品纯度可达78.3％以上。
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公开(公告)号：CN113699137B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202111033981.6
申请日：2021-09-03
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
摘要： 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种黄芪甲苷木糖苷酶突变体及其应用，所述突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列突变得到；所述突变的位点包括第202位、第322位、第372和第548位中的一种或多种。本发明中的黄芪甲苷木糖苷酶突变体通过4个位点的单点突变或组合突变，能够显著提高酶水解黄芪甲苷C3位置木糖苷键的水解活性，相较于野生型黄芪甲苷木糖苷酶，对底物黄芪甲苷的催化活性提高了1～20倍，大幅降低环黄芪醇工业生产的成本，使酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的生产效率显著提高。
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公开(公告)号：CN111893158B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202010817259.0
申请日：2020-08-14
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
摘要： 本发明涉及生物转化技术领域，具体涉及一种利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。本发明的方法是以黄芪甲苷为底物，利用木糖苷酶和葡萄糖苷酶双酶复合后，经过一步水解断裂底物C3位置的木糖苷键和C6位置的葡萄糖苷键得到环黄芪醇的方法。本发明得到的环黄芪醇的纯度能够达到98％以上，并且该方法操作简单，无污染，反应温度更温和，酶转化机理明确以及酶的底物适应性更宽，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN113584100B
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202110904630.1
申请日：2021-08-07
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
IPC分类号： C12P17/16
摘要： 本发明提供了一种裂解酶在制备低聚原花青素中的应用以及蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，涉及生物转化技术领域。所述裂解酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1～5中的一种。蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，包括以下步骤：葡萄籽用水浸泡后进行爆破处理，得到爆破样品；对所得爆破样品进行脱脂，得脱脂样品；将所得脱脂样品和提取液混合进行提取，得到高聚原花青素粗提物；将所得高聚原花青素粗提物和裂解酶混合，无氧条件下反应，得低聚原花青素。本申请所述制备低聚原花青素的方法具有高聚原花青素降解工艺简单、反应条件温和、环境污染小以及低聚原花青素得率高等优点。
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公开(公告)号：CN113584100A
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202110904630.1
申请日：2021-08-07
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
IPC分类号： C12P17/16
摘要： 本发明提供了一种裂解酶在制备低聚原花青素中的应用以及蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，涉及生物转化技术领域。所述裂解酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1～5中的一种。蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，包括以下步骤：葡萄籽用水浸泡后进行爆破处理，得到爆破样品；对所得爆破样品进行脱脂，得脱脂样品；将所得脱脂样品和提取液混合进行提取，得到高聚原花青素粗提物；将所得高聚原花青素粗提物和裂解酶混合，无氧条件下反应，得低聚原花青素。本申请所述制备低聚原花青素的方法具有高聚原花青素降解工艺简单、反应条件温和、环境污染小以及低聚原花青素得率高等优点。
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公开(公告)号：CN111893158A
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN202010817259.0
申请日：2020-08-14
申请人： 威海百合生物技术股份有限公司 , 北京化工大学
摘要： 本发明涉及生物转化技术领域，具体涉及一种利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。本发明的方法是以黄芪甲苷为底物，利用木糖苷酶和葡萄糖苷酶双酶复合后，经过一步水解断裂底物C3位置的木糖苷键和C6位置的葡萄糖苷键得到环黄芪醇的方法。本发明得到的环黄芪醇的纯度能够达到98％以上，并且该方法操作简单，无污染，反应温度更温和，酶转化机理明确以及酶的底物适应性更宽，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN118956785A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202410968134.6
申请日：2024-07-18
申请人： 北京化工大学
摘要： 本发明提供了阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶表面突变体及其应用。所述阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶表面突变体是由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列发生氨基酸突变得到的，包括以下至少一种氨基酸突变：D102E、E163K、E190K、L196F、K199N。本发明还提供了一种利用上述阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶突变体构建的合成香豆素类化合物的工程菌。所述阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶突变体具有较好的酶活性及稳定性，其酶活性提高了1.7倍以上，甚至可以提高至8.4倍；所以，上述工程菌能够实现东莨菪素、秦皮素、秦皮苷、东莨菪苷、秦皮乙素、秦皮甲素或菊苣苷等香豆素类化合物的高效生物合成，为香豆素类化合物的微生物合成提供了参考。
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公开(公告)号：CN118460442A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410289151.7
申请日：2024-03-13
申请人： 北京化工大学
摘要： 本发明提供了一种合成乳清酸的工程菌，利用CRISPR基因编辑技术在大肠杆菌基因组内整合了氨基甲酰磷酸合成酶carAB、天冬氨酸氨基甲酰转移酶pyrBI、二氢乳清酸酶pyrC和二氢乳清酸脱氢酶pyrD以增强下游途径，其次在宿主内整合天冬氨酸氨基转移酶aspC和嘧啶核苷酸脱氢酶pntAB提高前体供应量。上述基因工程菌与原始的需要导入质粒生产乳清酸重组工程菌相比，利用此工程菌生产乳清酸具有稳定性强、转换率高和生产成本低等优点。
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公开(公告)号：CN118421584A
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410281058.1
申请日：2024-03-12
申请人： 北京化工大学
IPC分类号： C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N15/52 , C12N15/61 , C12N15/53 , C12N15/60 , C12P17/06 , C12R1/19
摘要： 本发明提供了一种查尔酮合成酶突变体及应用。所述查尔酮合成酶突变体是由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列发生氨基酸突变得到的，包括以下至少一种氨基酸突变：M64L、E192V、G231A、G256N、L268Y、S353T。所述查尔酮合成酶突变体具有较好的酶活性及稳定性，并将所述查尔酮合成酶突变体导入到大肠杆菌中，能够进一步提高柚皮素产量，为黄酮类化合物的微生物合成提供参考，所以，本发明还提供了一种上述查尔酮合成酶突变体在黄酮类化合物生物合成中的应用，其中，利用所述查尔酮合成酶突变体构建的工程菌，能够使柚皮素提高0.15倍以上，甚至可以提高1.4～2.2倍；还能够使芹菜素产量的可以提高0.13倍以上，甚至可以提高1.15～1.9倍。
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