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公开(公告)号：CN102719465A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201110077001.2
申请日：2011-03-29
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/63 , A01K67/027
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及可诱导性组织特异性表达载体及其用途。本可诱导性组织特异性表达载体，主要包括以下结构：EF1α启动子，EGFP荧光标记基因，两端连有同向LoxP序列的BGHpolyA加尾转录终止序列和内部引入酶切位点的内含子序列；所述载体为pEFGLPAL-MIR，其使用EF1alpha通用启动子驱动基因表达，EGFP荧光标记基因用于指示基因的表达，两段连有同向LoxP71和LoxP66的BDHpolyA加尾转录终止信号，可被Cre酶诱导；在所述的终止信号其后的是一段内含子序列，表达miRNA前体插入该内含子中。本发明中构建的microRNA表达载体可成功的表达特异的microRNA，并可通过多种方法确定microRNA的表达；所述的表达载体在ES细胞中，microRNA表达不容易被沉默，能成功的应用于转基因小鼠的制备。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102719465B
公开(公告)日：2014-01-08
申请号：CN201110077001.2
申请日：2011-03-29
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/63 , A01K67/027
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及可诱导性组织特异性表达载体及其用途。本可诱导性组织特异性表达载体，主要包括以下结构：EF1α启动子，EGFP荧光标记基因，两端连有同向LoxP序列的BGHpolyA加尾转录终止序列和内部引入酶切位点的内含子序列；所述载体为pEFGLPAL-MIR，其使用EF1alpha通用启动子驱动基因表达，EGFP荧光标记基因用于指示基因的表达，两段连有同向LoxP71和LoxP66的BDHpolyA加尾转录终止信号，可被Cre酶诱导；在所述的终止信号其后的是一段内含子序列，表达miRNA前体插入该内含子中。本发明中构建的microRNA表达载体可成功的表达特异的microRNA，并可通过多种方法确定microRNA的表达；所述的表达载体在ES细胞中，microRNA表达不容易被沉默，能成功的应用于转基因小鼠的制备。
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公开(公告)号：CN117530238A
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202210940917.4
申请日：2022-08-07
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，涉及基于同源重组基因编辑技术构建人源化GBA基因F213I突变戈谢氏病小鼠模型的方法及用途。本发明利用构建的人源化GBA基因F213I突变戈谢氏病小鼠模型完成了F213I小鼠胚胎成纤维干细胞的体外同源重组基因编辑修复实验，本发明还构建了GBA基因野生型、部分人源化型以及部分人源化基础上引入F213I突变的过表达载体，并将其转入敲除GBA基因的人293A细胞中使其表达葡萄糖脑苷酶(GCase)，结果显示部分人源化对GCase酶活性影响有限，而引入F213I能够显著降低GCase酶活性。本发明为基因编辑治疗F213I突变戈谢氏病提供了体外实验数据。有助于为戈谢氏病提供一种治疗费用低、疗程短以及具有其他副作用少的新的基因治疗方法。
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公开(公告)号：CN108524952A
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201710126646.8
申请日：2017-03-06
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种腺相关病毒AAV9及其在制备治疗戈谢氏病的制剂中的用途，本发明中，构建了pAAV-CMV-Gba-MCS-3flag重组质粒表达载体，其中整合入了Gba基因，包装了腺相关病毒AAV9，建立了成年小鼠全身性诱导型戈谢氏病模型，通过腺相关病毒AAV9对戈谢氏实验模型进行干预，能表达野生型β-葡糖脑苷脂酶基因（GBA），补充患者有缺陷的GBA，本发明的干预治疗周期短，治疗效果明显，所需费用仅为酶替代疗法高昂的治疗费用的几百分之一，且本发明对I型、II型和III型戈谢氏病均适用。本发明相较于骨髓移植风险小、治疗所需腺相关病毒相较于骨髓供体更加易获得。本发明的重组质粒包装的腺相关病毒AAV9适用于制备治疗戈谢氏病的制剂。进一步为戈谢氏病提供一种新的干预治疗手段。
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公开(公告)号：CN102719518B
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201110077002.7
申请日：2011-03-29
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及一种基因诱导DNA去甲基化的检测方法。本发明利用筛选的已确定甲基化状态的细胞株为基础，收集基因与细胞株的混合克隆并测定其DNA甲基化的状态，对比未转基因的细胞株甲基化状态，得到检测结果。本发明还通过构建人工CpG岛报告基因载体PCBS-luc，体外使用甲基转移酶M.SssI对载体进行甲基化处理，并与anti-hygromycin基因表达载体共转HEK293细胞，使用潮酶素B筛选出完全甲基化、部分甲基化和非甲基化的PCBS稳定整合细胞株。本发明可用于观察目标蛋白去甲基化的功能、检测DNA甲基化或去甲基化的功能、观察组蛋白修饰与DNA甲基化之间的关系，还可用于研究环境因子对于细胞DNA甲基化的影响。
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公开(公告)号：CN102719518A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201110077002.7
申请日：2011-03-29
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及一种基因诱导DNA去甲基化的检测方法。本发明利用筛选的已确定甲基化状态的细胞株为基础，收集基因与细胞株的混合克隆并测定其DNA甲基化的状态，对比未转基因的细胞株甲基化状态，得到检测结果。本发明还通过构建人工CpG岛报告基因载体PCBS-luc，体外使用甲基转移酶M.SssI对载体进行甲基化处理，并与anti-hygromycin基因表达载体共转HEK293细胞，使用潮酶素B筛选出完全甲基化、部分甲基化和非甲基化的PCBS稳定整合细胞株。本发明可用于观察目标蛋白去甲基化的功能、检测DNA甲基化或去甲基化的功能、观察组蛋白修饰与DNA甲基化之间的关系，还可用于研究环境因子对于细胞DNA甲基化的影响。
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