一种检测DNA主动去甲基化的方法

    公开(公告)号:CN102719518B

    公开(公告)日:2015-07-29

    申请号:CN201110077002.7

    申请日:2011-03-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术领域,涉及一种基因诱导DNA去甲基化的检测方法。本发明利用筛选的已确定甲基化状态的细胞株为基础,收集基因与细胞株的混合克隆并测定其DNA甲基化的状态,对比未转基因的细胞株甲基化状态,得到检测结果。本发明还通过构建人工CpG岛报告基因载体PCBS-luc,体外使用甲基转移酶M.SssI对载体进行甲基化处理,并与anti-hygromycin基因表达载体共转HEK293细胞,使用潮酶素B筛选出完全甲基化、部分甲基化和非甲基化的PCBS稳定整合细胞株。本发明可用于观察目标蛋白去甲基化的功能、检测DNA甲基化或去甲基化的功能、观察组蛋白修饰与DNA甲基化之间的关系,还可用于研究环境因子对于细胞DNA甲基化的影响。

    一种检测DNA主动去甲基化的方法

    公开(公告)号:CN102719518A

    公开(公告)日:2012-10-10

    申请号:CN201110077002.7

    申请日:2011-03-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术领域,涉及一种基因诱导DNA去甲基化的检测方法。本发明利用筛选的已确定甲基化状态的细胞株为基础,收集基因与细胞株的混合克隆并测定其DNA甲基化的状态,对比未转基因的细胞株甲基化状态,得到检测结果。本发明还通过构建人工CpG岛报告基因载体PCBS-luc,体外使用甲基转移酶M.SssI对载体进行甲基化处理,并与anti-hygromycin基因表达载体共转HEK293细胞,使用潮酶素B筛选出完全甲基化、部分甲基化和非甲基化的PCBS稳定整合细胞株。本发明可用于观察目标蛋白去甲基化的功能、检测DNA甲基化或去甲基化的功能、观察组蛋白修饰与DNA甲基化之间的关系,还可用于研究环境因子对于细胞DNA甲基化的影响。

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