一种酶法制备L-二氢乳清酸的方法

    公开(公告)号:CN102787147B

    公开(公告)日:2014-10-08

    申请号:CN201210316992.X

    申请日:2012-08-31

    Abstract: 本发明公开了一种酶法制备L-二氢乳清酸的方法。该方法包括下列步骤:采用氰酸盐和L-天冬氨酸及其盐为原料,在碱性条件下进行反应,形成N-氨甲酰-L-天冬氨酸;以二氢乳清酸酶或含有二氢乳清酸酶的菌体为催化剂,在弱酸性条件下,催化N-氨甲酰-L-天冬氨酸环合制备L-二氢乳清酸;将所得二氢乳清酸酶转化溶液经分离,浓缩,结晶得L-二氢乳清酸。本方法采用二氢乳清酸酶催化N-氨甲酰-L-天冬氨酸制备L-二氢乳清酸,原料制备、反应体系简单,产物分离容易,避免了化学合成方法中原料的难以获取的缺点,二氢乳清酸酶活性高、反应时间短。

    一种一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法

    公开(公告)号:CN103243141B

    公开(公告)日:2015-04-01

    申请号:CN201310199866.5

    申请日:2013-05-27

    Abstract: 本发明公开了一种一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法。该方法包括下列步骤:采用5-羧乙基海因与氨基酸进行水相接肽反应,形成5-羧乙基海因小肽类化合物;反应完成后无需提取分离直接加入同时含有海因酶与氨甲酰酶的菌体为催化剂进行酶催化水解开环反应,得到γ-谷氨酰小肽类化合物。本发明方法采用海因环共保护谷氨酸的α-氨基和α-羧基,仅暴露出γ-羧基,保证了接肽反应的位置专一性;采用水相接肽,中间产物无需提取分离直接进行下一步酶反应,“一锅法”反应过程可有效提高反应总收率,同时水相反应也避免了有机溶剂带来的环境污染问题;采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,减少了副反应的发生。

    羧乙基海因酶生产菌株及其应用

    公开(公告)号:CN103243054B

    公开(公告)日:2014-10-29

    申请号:CN201310198458.8

    申请日:2013-05-23

    Abstract: 本发明一种羧乙基海因酶生产菌,其特征在于,其分类命名为粪产碱菌粪亚种(Alcaligenes faecalis subsp.faecalis),该菌株已于2013年5月13号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.7585。本发明还公开了羧乙基海因酶生产菌的应用。本发明的菌株粪产碱菌粪亚种(Alcaligenes faecalis subsp.faecalis)的羧乙基海因酶的活性为0.064U/ml,纯化后的酶活可以达到0.61U/ml,构建的基因工程菌的酶活为3.06U/ml,重组菌发酵方法简单。对底物转化率高,反应进行2小时以后对底物的转化率已经达到95%,4小时的转化率为99.98%,在催化羧乙基海因合成中都有较好的应用前景。

    一种一锅法制备γ-谷氨酰胺类化合物的方法

    公开(公告)号:CN103243130A

    公开(公告)日:2013-08-14

    申请号:CN201310199615.7

    申请日:2013-05-27

    Abstract: 本发明公丌了一种一锅法制备γ-谷氨酰胺类化合物的方法。该方法包括下列步骤:采用5-羧乙基海因与胺类化合物进行水相酰胺化反应,形成5-羧乙基海因酰胺类化合物;反应完成后无需提取分离直接加入同时含有海因酶与氨甲酰酶的菌体为催化剂进行酶催化水解丌环反应,得到γ-谷氨酰胺类化合物。本发明采用海因环共保护谷氨酸的α-氨基和α-羧基,仅暴露出γ-羧基,保证了酰胺化反应的位置专一性;采用水相酰胺化,中间产物无需提取分离直接进行下一步酶反应,“一锅法”反应过程可有效提高反应总收率,同时水相反应也避免了有机溶剂带来的环境污染问题;采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,减少了副反应的发生。

    羧乙基海因酶生产菌株及其应用

    公开(公告)号:CN103243054A

    公开(公告)日:2013-08-14

    申请号:CN201310198458.8

    申请日:2013-05-23

    Abstract: 本发明一种羧乙基海因酶生产菌,其特征在于,其分类命名为粪产碱菌粪亚种(Alcaligenes faecalis subsp.faecalis),该菌株已于2013年5月13号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.7585。本发明还公开了羧乙基海因酶生产菌的应用。本发明的菌株粪产碱菌粪亚种(Alcaligenes faecalis subsp.faecalis)的羧乙基海因酶的活性为0.064U/ml,纯化后的酶活可以达到0.61U/ml,构建的基因工程菌的酶活为3.06U/ml,重组菌发酵方法简单。对底物转化率高,反应进行2小时以后对底物的转化率已经达到95%,4小时的转化率为99.98%,在催化羧乙基海因合成中都有较好的应用前景。

    一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法

    公开(公告)号:CN102864196B

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201210379592.3

    申请日:2012-10-09

    Abstract: 本发明公开了一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法。该方法包括下列步骤:采用二氢乳清酸与氨基酸酯或小二肽类酯化合物进行接肽反应,形成二氢乳清酸小肽酯类化合物;进而采用稀碱溶液水解酯键,暴露出末端羧基;利用二氢乳清酸酶水解暴露出相应羧基的二氢乳清酸小肽类化合物,形成N-氨甲酰化天冬氨酰小肽化合物;进而采用亚硝酸水解脱去氨甲酰基团即可获得α-天冬氨酰小肽类化合物。本发明方法采用二氢乳清酸环共保护天冬氨酸中的α-氨基和β-羧基,仅暴露出α-羧基,保证了接肽反应的位置专一性;同时采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,操作简单,减少了副反应的发生。

    一种一锅法制备γ-谷氨酰胺类化合物的方法

    公开(公告)号:CN103243130B

    公开(公告)日:2015-08-19

    申请号:CN201310199615.7

    申请日:2013-05-27

    Abstract: 本发明公开了一种一锅法制备γ-谷氨酰胺类化合物的方法。该方法包括下列步骤:采用5-羧乙基海因与胺类化合物进行水相酰胺化反应,形成5-羧乙基海因酰胺类化合物;反应完成后无需提取分离直接加入同时含有海因酶与氨甲酰酶的菌体为催化剂进行酶催化水解开环反应,得到γ-谷氨酰胺类化合物。本发明采用海因环共保护谷氨酸的α-氨基和α-羧基,仅暴露出γ-羧基,保证了酰胺化反应的位置专一性;采用水相酰胺化,中间产物无需提取分离直接进行下一步酶反应,“一锅法”反应过程可有效提高反应总收率,同时水相反应也避免了有机溶剂带来的环境污染问题;采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,减少了副反应的发生。

    一种一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法

    公开(公告)号:CN103243141A

    公开(公告)日:2013-08-14

    申请号:CN201310199866.5

    申请日:2013-05-27

    Abstract: 本发明公开了一种一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法。该方法包括下列步骤:采用5-羧乙基海因与氨基酸进行水相接肽反应,形成5-羧乙基海因小肽类化合物;反应完成后无需提取分离直接加入同时含有海因酶与氨甲酰酶的菌体为催化剂进行酶催化水解开环反应,得到γ-谷氨酰小肽类化合物。本发明方法采用海因环共保护谷氨酸的α-氨基和α-羧基,仅暴露出γ-羧基,保证了接肽反应的位置专一性;采用水相接肽,中间产物无需提取分离直接进行下一步酶反应,“一锅法”反应过程可有效提高反应总收率,同时水相反应也避免了有机溶剂带来的环境污染问题;采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,减少了副反应的发生。

    一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法

    公开(公告)号:CN102864196A

    公开(公告)日:2013-01-09

    申请号:CN201210379592.3

    申请日:2012-10-09

    Abstract: 本发明公开了一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法。该方法包括下列步骤:采用二氢乳清酸与氨基酸酯或小二肽类酯化合物进行接肽反应,形成二氢乳清酸小肽酯类化合物;进而采用稀碱溶液水解酯键,暴露出末端羧基;利用二氢乳清酸酶水解暴露出相应羧基的二氢乳清酸小肽类化合物,形成N-氨甲酰化天冬氨酰小肽化合物;进而采用亚硝酸水解脱去氨甲酰基团即可获得α-天冬氨酰小肽类化合物。本发明方法采用二氢乳清酸环共保护天冬氨酸中的α-氨基和β-羧基,仅暴露出α-羧基,保证了接肽反应的位置专一性;同时采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,操作简单,减少了副反应的发生。

    一种酶法制备L-二氢乳清酸的方法

    公开(公告)号:CN102787147A

    公开(公告)日:2012-11-21

    申请号:CN201210316992.X

    申请日:2012-08-31

    Abstract: 本发明公开了一种酶法制备L-二氢乳清酸的方法。该方法包括下列步骤:采用氰酸盐和L-天冬氨酸及其盐为原料,在碱性条件下进行反应,形成N-氨甲酰-L-天冬氨酸;以二氢乳清酸酶或含有二氢乳清酸酶的菌体为催化剂,在弱酸性条件下,催化N-氨甲酰-L-天冬氨酸环合制备L-二氢乳清酸;将所得二氢乳清酸酶转化溶液经分离,浓缩,结晶得L-二氢乳清酸。本方法采用二氢乳清酸酶催化N-氨甲酰-L-天冬氨酸制备L-二氢乳清酸,原料制备、反应体系简单,产物分离容易,避免了化学合成方法中原料的难以获取的缺点,二氢乳清酸酶活性高、反应时间短。

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