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公开(公告)号：CN102864196B
公开(公告)日：2014-07-02
申请号：CN201210379592.3
申请日：2012-10-09
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P21/02
Abstract: 本发明公开了一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法。该方法包括下列步骤：采用二氢乳清酸与氨基酸酯或小二肽类酯化合物进行接肽反应，形成二氢乳清酸小肽酯类化合物；进而采用稀碱溶液水解酯键，暴露出末端羧基；利用二氢乳清酸酶水解暴露出相应羧基的二氢乳清酸小肽类化合物，形成N-氨甲酰化天冬氨酰小肽化合物；进而采用亚硝酸水解脱去氨甲酰基团即可获得α-天冬氨酰小肽类化合物。本发明方法采用二氢乳清酸环共保护天冬氨酸中的α-氨基和β-羧基，仅暴露出α-羧基，保证了接肽反应的位置专一性；同时采用酶法水解开环，避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤，操作简单，减少了副反应的发生。
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公开(公告)号：CN102864196A
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201210379592.3
申请日：2012-10-09
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P21/02
Abstract: 本发明公开了一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法。该方法包括下列步骤：采用二氢乳清酸与氨基酸酯或小二肽类酯化合物进行接肽反应，形成二氢乳清酸小肽酯类化合物；进而采用稀碱溶液水解酯键，暴露出末端羧基；利用二氢乳清酸酶水解暴露出相应羧基的二氢乳清酸小肽类化合物，形成N-氨甲酰化天冬氨酰小肽化合物；进而采用亚硝酸水解脱去氨甲酰基团即可获得α-天冬氨酰小肽类化合物。本发明方法采用二氢乳清酸环共保护天冬氨酸中的α-氨基和β-羧基，仅暴露出α-羧基，保证了接肽反应的位置专一性；同时采用酶法水解开环，避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤，操作简单，减少了副反应的发生。
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公开(公告)号：CN103243054B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201310198458.8
申请日：2013-05-23
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明一种羧乙基海因酶生产菌，其特征在于，其分类命名为粪产碱菌粪亚种（Alcaligenes faecalis subsp.faecalis），该菌株已于2013年5月13号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7585。本发明还公开了羧乙基海因酶生产菌的应用。本发明的菌株粪产碱菌粪亚种（Alcaligenes faecalis subsp.faecalis）的羧乙基海因酶的活性为0.064U/ml，纯化后的酶活可以达到0.61U/ml，构建的基因工程菌的酶活为3.06U/ml，重组菌发酵方法简单。对底物转化率高，反应进行2小时以后对底物的转化率已经达到95%，4小时的转化率为99.98%，在催化羧乙基海因合成中都有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN103243054A
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201310198458.8
申请日：2013-05-23
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明一种羧乙基海因酶生产菌，其特征在于，其分类命名为粪产碱菌粪亚种（Alcaligenes faecalis subsp.faecalis），该菌株已于2013年5月13号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7585。本发明还公开了羧乙基海因酶生产菌的应用。本发明的菌株粪产碱菌粪亚种（Alcaligenes faecalis subsp.faecalis）的羧乙基海因酶的活性为0.064U/ml，纯化后的酶活可以达到0.61U/ml，构建的基因工程菌的酶活为3.06U/ml，重组菌发酵方法简单。对底物转化率高，反应进行2小时以后对底物的转化率已经达到95%，4小时的转化率为99.98%，在催化羧乙基海因合成中都有较好的应用前景。
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