公开(公告)号：CN104789589B

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201410024751.7

申请日：2014-01-20

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭健 ,  潘中勉 ,  蒋思文 ,  王荣

IPC: C12N15/85 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  C07K1/14 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种猪源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白3FliCon融合蛋白及其应用，本发明提供了一种猪源ETEC3个拷贝基因fliC的重组质粒pRSET‑3FliCon。将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pRSET‑3FliCon表达融合蛋白3FliCon。利用表达的重组蛋白主动免疫新西兰雄兔，制备了针对这种蛋白的血清抗体，验证了重组蛋白具有良好的抗原性，培养肠上皮细胞系IPEC‑J2，利用抑制粘附试验，证明了猪源ETEC鞭毛在参与粘附小肠上皮细胞过程中起重要作用。利用该融合蛋白制备的鸡卵黄抗体能抑制ETEC在体外对上皮细胞的粘附，且抑制不同血清型的ETEC菌株。

公开(公告)号：CN104560919A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201510029482.8

申请日：2015-01-21

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  李玉娇 ,  彭健 ,  柴进 ,  李凤娥

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C07K16/40

CPC classification number: C12N9/2445 ,  C07K16/40 ,  C12N15/70 ,  C12Y302/01021

Abstract: 本发明属于动物基因工程领域，具体涉及一种扣囊复膜孢酵母菌多克隆抗体及制备方法。本发明分离的扣囊复膜孢酵母菌CB蛋白的BGL1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。对扣囊复膜孢酵母菌CB蛋白抗原表位预测分析,得到含抗原表位较多的片段，构建大肠杆菌重组表达载体，用该表达载体转化大肠杆菌，得到表达CB蛋白的重组株。对重组株进行诱导表达和对CB蛋白大量表达、纯化，以纯化的CB蛋白作扣囊复膜孢酵母菌多克隆抗体的免疫原免疫动物得到多克隆抗体。本发明的多抗特异性好，纯度和效价高，保存期长，可用于遗传工程中的免疫印迹、免疫组化分析等。

公开(公告)号：CN104404045A

公开(公告)日：2015-03-11

申请号：CN201410804964.1

申请日：2014-12-20

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  李玉娇 ,  彭健 ,  柴进 ,  李凤娥

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/42

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及猪肝脏TTR基因启动子在转基因小鼠遗传操作中的应用。在前期研究基础上，对pTTRs-BGLhis-control载体作线性化处理，将线性化片段利用原核显微注射获得转基因小鼠，在活体水平上对该启动子的肝脏组织特异性进行了鉴定。结果表明该启动子能够在小鼠肝脏组织中特异性驱动外源基因BGL1的表达，并产生具备一定酶活力的β-葡萄糖苷酶。本发明将猪TTR基因启动子应用于转基因动物，为动物基因工程提供可利用的组织特异性启动子，为提高非反刍动物动物饲料消化利用率提供了条件，也为基因工程技术改良畜禽的生产性能提供了重要的功能元件。

公开(公告)号：CN103421787B

公开(公告)日：2015-01-28

申请号：CN201310145821.X

申请日：2013-04-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  靳玮

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明具体涉及一种在猪肌肉组织高效表达的融合启动子的分离鉴定。从梅山猪中克隆了MEF2C基因上游4个不同启动子缺失片段，将这些片段构建至pGL3-Basic载体中后确定它的活性，其中pGL3-MEF2CP3的活性相对较强，该启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。通过替换pGL3-Basic载体luc片段为PPAR gama CDS序列，其核苷酸序列如SEQID NO：2所示，构建融合启动子载体pGL3-MEF2CP3-PPAR gama。通过半定量PCR及蛋白质印迹验证PPAR gama的表达均有提高。

公开(公告)号：CN103923924A

公开(公告)日：2014-07-16

申请号：CN201410185208.5

申请日：2014-05-05

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  杨永兰

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种肌肉组织特异性表达系统的构建，该系统是由猪的骨骼肌特异性表达基因α-actin的核心启动子与蜕皮素诱导表达系统构成，达到既可以在肌肉中特异性表达目的基因又可对目的基因的表达进行精确表达。其特征是：将蜕皮素诱导表达系统中的调节质粒替换为猪骨骼肌特异性表达基因的核心启动子区域，将β-半乳糖苷酶报告基因插入到蜕皮素诱导系统反应质的多克隆位点，以两个重组载体作为组织特异性诱导表达系统共转染到小鼠C2C12细胞以及肌管。本发明构建的系统统具有独立启动活性兼肌肉组织特异性，可在诱导时间和诱导剂量的作用下调控目的基因的表达。

公开(公告)号：CN102776184B

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201110427186.5

申请日：2011-12-12

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐德全 ,  孙小瑞 ,  刘敏 ,  熊远著 ,  邓昌彦 ,  蒋思文

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于猪分子标记制备技术领域，具体涉及一种猪CKM的5’侧翼启动子片段作为猪胴体性状的遗传标记及制备方法与应用。该遗传标记具有序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。其特征在于该序列的第82bp处分别存在一个A/G和G/A的突变，引起DraIII-RFLP的多态性。利用该遗传标记对大白猪和梅山猪F2代进行了与猪胴体性状的关联分析，检测了含有不同基因型的大白猪和梅山猪肌肉组织中CKM的表达量。本发明还公开了该遗传标记的分型检测方法，为猪胴体性状分子标记辅助选择提供了新的遗传标记和检测方法。

公开(公告)号：CN103421793A

公开(公告)日：2013-12-04

申请号：CN201310327149.6

申请日：2013-07-28

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  周鹏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种猪的肝脏特异性表达基因TTR2205bp启动子的克隆与活性分析。从猪的基因组中克隆了肝脏特异性表达基因TTR翻译起始密码子ATG上游2205bp的调控序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；结果表明2205bp的TTR启动子具有独立的启动活性兼肝脏组织特异性，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。公开了该启动子片段的制备方法、双荧光素酶活性检测系统和RT-PCR方法对启动子活性分析的应用。

公开(公告)号：CN103421781A

公开(公告)日：2013-12-04

申请号：CN201210229853.3

申请日：2012-07-04

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  高瑞娟

IPC: C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及到猪的肌肉组织特异性表达基因myf6不同长度启动子区域的分离鉴定和功能验证。从猪的基因组中克隆了肌肉组织特异性表达基因myf6上游6个不同长度的启动子，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2-SEQ ID NO：7所示；结果表明-88bp到-1510bp和-1070bp到-1382bp有独立的启动活性。本发明同时公开了6个不同缺失启动子片段、相应重组表达载体的制备方法及双荧光素酶活性检测系统对启动子活性分析的应用。

公开(公告)号：CN102453720B

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201010527097.3

申请日：2010-10-28

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  邓兵

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明属于动物基因工程应用领域。从大白猪中克隆了MSTN基因上游6个不同启动子缺失片段，它们分别为MSTN-P1、MSTN-P2、MSTN-P3、MSTN-P4、MSTN-P5、MSTN-P6。将这些片段构建至pGL3-Basic载体中后确定它们的活性，MSTN-P2活性相对较强，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。通过在该片段中加入SV40增强子片段，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示，构建融合启动子载体pGL3-MSTNp2-EnhancerNX，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。通过转染肌源性细胞及非肌源性细胞发现该启动子片段的活性大大增强。本发明公开了该融合启动子的构建过程，从而为构建肌肉特异的转基因动物或诱导外源基因在肌肉组织中高效表达提供了新的遗传资源。

公开(公告)号：CN102604947A

公开(公告)日：2012-07-25

申请号：CN201110028697.X

申请日：2011-01-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  李芳

IPC: C12N15/113

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及两个猪脂肪组织特异性嵌合启动子的克隆、功能验证及应用。本发明验证了adi-pro调控元件的活性，通过嵌合的方法构建了含有pCMVIE启动子和SV40增强子的不同嵌合启动子，使adi-pro调控元件的活性大大提高，为基因工程和分子育种提供了新的特异表达的启动子资源。所述的启动子的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所述。