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公开(公告)号：CN102426126B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110251106.5
申请日：2011-08-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N1/30
Abstract: 本发明公开了一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，包括以下步骤：1)利用免疫染色方法，以抗CDX2单克隆抗体作为一抗，将其与特异表达在牛囊胚滋养层细胞的CDX2分子进行免疫结合；2)利用免疫染色方法，以红色荧光标记的能够与抗CDX2单克隆抗体结合的抗体作为二抗，对清洗后的结合有一抗的牛囊胚进行免疫染色；3)在免疫染色完成后，对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色，以形成差异染色。本发明在CDX2蛋白在滋养层细胞内特异性表达，而在内细胞团细胞上不表达的基础上，这样利用基于CDX2分子的红色免疫染色和DAPI细胞核蓝色染色来进行差异染色，准确率为100％，而且图片清晰漂亮。
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公开(公告)号：CN102296090B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110249842.7
申请日：2011-08-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。
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公开(公告)号：CN102608323A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210082219.1
申请日：2012-03-26
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: G01N33/577 , G01N33/53
Abstract: 本发明公开了一种基于哺乳动物囊胚的分子免疫检测的胚胎质量分析方法，以分别在囊胚的内细胞团和滋养外胚层细胞中表达的OCT4和CDX2关键转录因子的表达作为分析哺乳动物囊胚的依据，根据其免疫染色结果来进行细胞水平、分子水平的分析，既涵盖传统的囊胚质量评定方法，又提出了准确性更高的谱系分化来进行评定：选择内细胞团细胞数和滋养外胚层细胞比值合适、第一次谱系分化完全的囊胚作为质量好的囊胚。与传统的囊胚质量评定方法相比，本发明不但可以从细胞水平来评定囊胚的质量，还可以从分子水平准确的对囊胚的质量和以后的发育潜能进行评定，方法简单且准确率高，能够为胚胎移植提供技术支持。
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公开(公告)号：CN102559752A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110403792.3
申请日：2011-12-07
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种质粒DNA或反义寡核苷酸转染附植前胚胎的方法，包括以下步骤：1)配制待转染的电穿孔溶液；2)对胚胎透明带进行弱化处理；3)将胚胎移入配制好的含电穿孔溶液，室温静置，然后再将胚胎连同电穿孔溶液移入电转槽中进行电穿孔。由于采用了电穿孔转染的方法，本发明还能同时将两种或多种质粒DNA，或者反义寡核苷酸一起转入附植前胚胎，如果构建的质粒DNA所携带的外源片段是某个关键基因或靶向某个关键基因的干扰片段，则可具体研究某个关键基因在小鼠附植前胚胎的发育过程中所起的具体作用。
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公开(公告)号：CN102226200A
公开(公告)日：2011-10-26
申请号：CN201110109953.8
申请日：2011-04-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及了一种牛Nramp1巨噬细胞特异性表达载体及其构建方法和应用。该方法以质粒pIRES2-EGFP为骨架载体，在多克隆位点Sal I与BamH I之间插入牛Nramp1开放阅读框序列，并用Nramp1基因表达调控序列替换掉骨架载体上巨细胞病毒(CMV)启动子序列，从而实现Nramp1基因在吞噬细胞内的特异性表达。本载体可以作为一种转基因载体应用在转基因抗病动物培育中。本发明还指出秦川牛Nramp1开放阅读框序列与GenBank中相应序列(GenBank序列号U12862.1)相似率为99.88％，存在两个碱基差异。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101851638A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN201010142997.6
申请日：2010-04-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体Psp-EGFP-Ipr1，以及基于该载体的包含包含Ipr1巨噬细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Psp-EGFP-Ipr1导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因Ipr1整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染Ipr1基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。
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公开(公告)号：CN101851602A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN200910021760.X
申请日：2009-03-31
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一种牛体细胞克隆胚胎培养液及其培养方法，该培养液包括市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)，还包括激活素A，该激活素A的浓度是20～80ng/mL；其培养方法是用常规条件培养牛体细胞颗粒细胞单层3天，从第4天开始，向市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)加入浓度为20～80ng/mL的激活素A，得到牛体细胞克隆胚胎培养液，再用该牛体细胞克隆胚胎培养液5天既得牛体细胞克隆胚胎。本发明提高了胚胎的8/16细胞率、囊胚率、孵化率，使得Na/K-ATPase、Glut-1、ActR II、Smad2等基因表达水平显著提高。特别适用于牛体细胞克隆领域的应用。
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公开(公告)号：CN100584951C
公开(公告)日：2010-01-27
申请号：CN200710017948.8
申请日：2007-05-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/63
Abstract: 本发明公开公开了一种通用型基因打靶载体的构建方法，该方法选择正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)，其中，在正选基因(neo)的两端加入Loxp序列，将正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)分别连入克隆载体pGEM-3Z，合成含有Bsp14071，Nhe1，Not1，Bsu151(Cla1)，Bst11071，Pf12311，Spe1，Pst1，Sac II稀少酶切位点的序列，将这段序列插入正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)之间，正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)之间的酶切位点为稀少的酶切位点，从而便于不同基因作为同源臂插入。在基因打靶载体正选基因的两端加上Loxp序列便于后续工作中去除正选基因。
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公开(公告)号：CN101117636A
公开(公告)日：2008-02-06
申请号：CN200710017948.8
申请日：2007-05-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/63
Abstract: 本发明公开了一种通用型基因打靶载体的构建方法，该方法选择正选基因(neo)和两个负选基因(HSV－tk1)，其中，在正选基因(neo)的两端加入Loxp序列，将正选基因(neo)和两个负选基因(HSV－tk1)分别连入克隆载体pGEM－3Z，合成含有Bsp14071，Nhe1，Not1，Bsu151(Cla1)，Bst11071，Pf12311，Spe1，Pst1，Sac II稀少酶切位点的序列，将这段序列插入正选基因(neo)和两个负选基因(HSV－tk1)之间，正选基因(neo)和两个负选基因(HSV－tk1)之间的酶切位点为稀少的酶切位点，从而便于不同基因作为同源臂插入。在基因打靶载体正选基因的两端加上Loxp序列便于后续工作中去除正选基因。
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公开(公告)号：CN118621023B
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202410819599.5
申请日：2024-06-24
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11 , G01N33/68 , A61K45/00 , A61P31/06
Abstract: 本发明公开了一种牛DDX58基因的单碱基/氨基酸突变在抗结核病中的应用，属于牛结核病防治技术领域，一种牛DDX58基因的单碱基突变在抗结核病中的应用，所述牛DDX58基因的CDS序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述单碱基突变位于牛基因组ARS‑UCD1.2版本参考序列8号染色体上5′端起第11603839个核苷酸。本发明提供的牛DDX58基因的单碱基突变对I型干扰素的生成量以及巨噬细胞对结核分枝杆菌的清除效果具有显著影响，与牛抗结核病性状高度连锁；提供的牛DDX58基因的单碱基/氨基酸突变可以作为牛结核病抗性连锁位点，用于牛结核病抗性育种中基因型选育，进而简化选育方法、缩短选育时间。
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