一种羊肺腺瘤病毒的体外稳定培养方法

    公开(公告)号:CN105420200A

    公开(公告)日:2016-03-23

    申请号:CN201610033932.5

    申请日:2016-01-19

    CPC classification number: C12N7/00 C12N2740/12021

    Abstract: 本发明公开了一种羊肺腺瘤病毒的体外稳定培养方法,该方法包括以下步骤:分离、纯化和培养患肺腺瘤的羊肺泡Ⅱ型细胞,设计并合成核苷酸序列(上游:5’-GATCCGGCCGGTGCTTCTAGGAATATTCAAGACGTAATCCTAGGAGCACCGGCATTTTTGTCGACA-3’,下游:5’-AGCTTGTCGACAAAAATGCCGGTGCTCCTAGGATTACGTCTTGAATATTCCTAGAAGCACCGGCCG-3’),构建siRNA干扰载体,将siRNA干扰载体转染肺泡Ⅱ型细胞。本发明的有益之处在于:本发明的培养方法通过siRNA技术让exJSRV在体外培养的细胞中稳定增殖。

    一种通用型牛β-酪蛋白位点基因打靶载体及其制备方法

    公开(公告)号:CN103160534A

    公开(公告)日:2013-06-19

    申请号:CN201310100213.7

    申请日:2013-03-26

    Abstract: 本发明公开了一种通用型牛β-酪蛋白位点基因打靶载体及其构建方法。所构建的载体包括5’同源臂和3’同源臂,以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700~850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明通过锌指核酸酶在DNA的特定位点产生缺口,通过同源重组末端接合来实现基因敲除,从而大大提高了基因敲除的效率;然后利用同源重组的方法将目的基因整合到体细胞的靶位点上,在打靶载体筛选基因和标记基因的两端加上Loxp序列便于后续工作中去除筛选基因和标记基因,从而提高体细胞克隆的效率。

    一种目的基因的漂移处理检测方法

    公开(公告)号:CN102086475A

    公开(公告)日:2011-06-08

    申请号:CN201010592751.9

    申请日:2010-12-13

    Abstract: 一种目的基因的漂移处理检测方法,包括收集转基因细胞培养液、核移植操作液和胚胎培养液等可能含有外源基因的液体,对其进行高压处理,然后对液体进行浓缩;针对外源基因的基因序列设计引物,通过PCR技术,特异性扩增外源基因的DNA片段,根据PCR扩增结果,判断在转基因细胞筛选过程中以及胚胎生产和培养过程中所产生的液体经处理后是否还有外源基因的存在。本发明这种处理检测方法完全可以避免外源基因的漂移,保证了转基因动物生产过程中的环境安全。适用于来源于人的防御素-3基因的转基因奶牛和山羊的生产过程中的基因漂移的检测。

    一种奶山羊性控精液制备方法

    公开(公告)号:CN111349158B

    公开(公告)日:2022-11-08

    申请号:CN202010153350.7

    申请日:2020-03-06

    Abstract: 本发明公开了一种奶山羊性控精液制备方法。首先制备了负载SRY抗体的抗原结合片段的磷酸钙纳米颗粒,按照一定的免疫程序将纳米颗粒注射到性成熟前雄性奶山羊睾丸内,通过抗体在睾丸内缓慢释放,并利用抗原抗体反应与减数分裂后Y精子细胞上的SRY抗原结合,阻碍Y精子的成熟分化,在雄性奶山羊体成熟后通过采精即可获得含有较高比例X精子的新鲜精液。本发明具有低成本、简便、易操作优势,不影响受精后胚胎的发育,提高了性控胚胎的生产效率,促进了奶山羊的快速扩繁。

    用于牛、羊X/Y精子快速分离的UTY抗体纳米颗粒的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN105646707A

    公开(公告)日:2016-06-08

    申请号:CN201610107323.X

    申请日:2016-02-26

    Inventor: 华松 张涌 付明哲

    Abstract: 本发明公开了一种用于牛、羊X/Y精子快速分离的UTY抗体纳米颗粒的制备方法及应用:利用Y精子UTY抗原重组蛋白制备抗Y精子UTY抗原的单克隆抗体;将所述单克隆抗体用胃蛋白酶进行酶切,并分离得到抗UTY抗原的Fab’片段;制备包含Fab’片段的磷酸钙纳米颗粒。本发明制备得到的UTY抗体纳米颗粒,具有在Y精子表面和进入其内部进行抗原抗体反应的能力,从而导致Y精子凝集,对X、Y精子的分离效率达到80~95%,具有X、Y精子分离简单、快速、廉价及效率高等特点,且损害极小。

    一种奶山羊性控精液制备方法

    公开(公告)号:CN111349158A

    公开(公告)日:2020-06-30

    申请号:CN202010153350.7

    申请日:2020-03-06

    Abstract: 本发明公开了一种奶山羊性控精液制备方法。首先制备了负载SRY抗体的抗原结合片段的磷酸钙纳米颗粒,按照一定的免疫程序将纳米颗粒注射到性成熟前雄性奶山羊睾丸内,通过抗体在睾丸内缓慢释放,并利用抗原抗体反应与减数分裂后Y精子细胞上的SRY抗原结合,阻碍Y精子的成熟分化,在雄性奶山羊体成熟后通过采精即可获得含有较高比例X精子的新鲜精液。本发明具有低成本、简便、易操作优势,不影响受精后胚胎的发育,提高了性控胚胎的生产效率,促进了奶山羊的快速扩繁。

    一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的重组牛胎儿成纤维细胞

    公开(公告)号:CN101591672B

    公开(公告)日:2011-09-07

    申请号:CN200910022664.7

    申请日:2009-05-22

    Abstract: 本发明涉及一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞,包括一种hBD3乳腺特异性表达载体,包含目的基因hBD3,分别在hBD3基因的5′端和3′端插入调控元件;所述的hBD3乳腺特异性表达载体为pEBB表达载体。一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞,其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞,通过转染外源性表达载体pEBB,将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。以包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞,通过SCNT获得转基因克隆胚,将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转hBD3基因的奶牛。

    一种牛胚胎体外早期着床培养体系

    公开(公告)号:CN112760225A

    公开(公告)日:2021-05-07

    申请号:CN202110114118.7

    申请日:2021-01-27

    Abstract: 本发明公开了一种牛胚胎体外早期着床培养体系,使用底部带有超微孔薄膜的Transwell小室作为上室培养胚胎,6孔细胞培养板的培养孔作为下室培养子宫内膜细胞,Transwell小室所带的超微孔薄膜允许胚胎全方位立体的进行分泌和吸收各种营养质,从而以接近自然的方式进行代谢和活动。根据位于下室内子宫内膜细胞层中的双核、三核或多核细胞的染色结果,可以对胚胎早期着床能力进行判定,从而提高妊娠效率。

    一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂

    公开(公告)号:CN103858821B

    公开(公告)日:2015-08-12

    申请号:CN201410113923.8

    申请日:2014-03-25

    Abstract: 本发明公开了一种增加奶山羊X精子比率的饲喂方法及营养添加剂,将雄性奶山羊在第6周断奶,然后将其生长过程分为以下5个生长阶段进行饲喂,在各个生长阶段每日喂养基础日粮,所述的基础日粮包括干草和混合精料,并以基础日粮中的混合精料为基准按补充比例进行叶酸、VB12和蛋氨酸的补充,补充比例自断奶后阶段到体成熟期阶段阶梯式递减。本发明可以直接利用外界营养因素增加奶山羊X精子比率,从而达到简便、快速地实现精子中X精子的分离,大幅度降低了分离成本,能够获得更多的雌性胚胎,从而有助于提高养殖业经济效益,同时也有利于性控技术在畜牧业领域的推广和应用。

    一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的重组牛胎儿成纤维细胞

    公开(公告)号:CN101591672A

    公开(公告)日:2009-12-02

    申请号:CN200910022664.7

    申请日:2009-05-22

    Abstract: 本发明涉及一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞,包括一种hBD3乳腺特异性表达载体,包含目的基因hBD3,分别在hBD3基因的5′端和3′端插入调控元件;所述的hBD3乳腺特异性表达载体为pEBB表达载体。一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞,其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞,通过转染外源性表达载体pEBB,将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。以包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞,通过SCNT获得转基因克隆胚,将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转hBD3基因的奶牛。

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