公开(公告)号：CN110220891A

公开(公告)日：2019-09-10

申请号：CN201910441446.0

申请日：2019-05-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李向梅 ,  王锦 ,  雷红涛 ,  沈兴 ,  孙远明 ,  黄日明

IPC: G01N21/78 ,  G01N33/558 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种便携式真菌毒素免疫层析定量检测装置及检测方法。所述便携式真菌毒素免疫层析定量检测装置包括真菌毒素免疫层析定量检测卡；所述真菌毒素免疫层析定量检测卡包括底板，底板上依次设有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；吸水纸和结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端，在硝酸纤维素膜的表面形成检测区；样品垫交叠压在结合垫上；结合垫上固定有胶体金、彩色乳胶微球或荧光微球标记的真菌毒素抗体；检测区内的硝酸纤维素膜上固定有真菌毒素抗原构成的检测线和羊抗鼠或羊抗兔IgG二抗构成的质控线。通过本发明装置能实现对玉米、大豆、小麦等谷物和饲料等样本现场快速、准确的定量检测，并能够实现数据的快速传输。

公开(公告)号：CN110054576A

公开(公告)日：2019-07-26

申请号：CN201910300552.7

申请日：2019-04-15

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 雷红涛 ,  许晶晶 ,  沈兴 ,  徐振林 ,  孙远明 ,  杨金易 ,  沈玉栋 ,  王弘 ,  肖治理

IPC: C07C319/18 ,  C07C321/14 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  C07K16/06 ,  G01N33/535 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种异丙甲草胺手性半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用。所述异丙甲草胺手性半抗原具有如式(I)所示的分子结构：本发明首先将消旋异丙甲草胺与3-巯基丙酸反应，得到半抗原；再将此半抗原进行手性拆分，拆分为四个立体异构体半抗原αRS-、αRR-、αSS-、αSR-MMPA，然后分别与载体蛋白偶联制得人工抗原。将这4种人工抗原分别免疫动物获取对映选择性抗体，得到的4种抗体对其对映体药物进行检测的IC50分别为28.89ng/mL、13.34ng/mL、27.07ng/mL、5.68ng/mL，特异性强、灵敏度高，可用于食品安全的现场快速检测，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN106565737B

公开(公告)日：2018-11-27

申请号：CN201610875386.X

申请日：2016-10-08

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 雷红涛 ,  张雅琼 ,  沈兴 ,  陆宁 ,  徐振林 ,  孙远明 ,  杨金易 ,  肖治理

IPC: C07D493/14 ,  C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K16/02 ,  C07K16/14 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种黄曲霉毒素B1半抗原、人工抗原及其高灵敏度、高特异性卵黄抗体的制备方法。本发明首先将黄曲霉毒素B1分子上双呋喃环中的碳碳双键进行加成反应引入游离羧基形成黄曲霉毒素B1半抗原，其结构式如式（I）所示：式（I）；再将该半抗原与载体蛋白偶联得到黄曲霉毒素B1人工抗原；由该人工抗原乳化后免疫鸡，得到黄曲霉毒素B1卵黄抗体。所述抗体对黄曲霉毒素B1的半抑制浓度（IC50）为4.23ng/mL，定量检测范围为0.29~61.83ng/mL，检测限为0.06ng/mL，且该抗体对AFB2、AFG1和AFG2的交叉反应率均低于1%。本发明的抗体同时具备高灵敏、特异性的特点，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN107167585A

公开(公告)日：2017-09-15

申请号：CN201710224738.X

申请日：2017-04-07

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 雷红涛 ,  张雅琼 ,  孙远明 ,  沈兴 ,  陆宁 ,  徐振林 ,  沈玉栋 ,  杨金易

IPC: G01N33/531 ,  G01N33/559 ,  G01N33/543

CPC classification number: G01N33/531 ,  G01N33/54346 ,  G01N33/559

Abstract: 本发明公开了一种新型小分子结构及其在检测蓝绿藻肝毒素方面的应用。所述新型小分子结构的结构式如式（I）所示：本发明首先获得了一种特殊的新型小分子结构作为免疫原，将该小分子及微囊藻毒素MC‑LR分别与载体蛋白偶联制得人工抗原，利用将该小分子人工抗原制备多克隆抗体，制备抗体标记的纳米金颗粒，将MC‑LR人工抗原包被于硝酸纤维膜上作为检测带，羊抗兔二抗作为控制带，依据免疫竞争法原理建立得快速检测蓝绿藻肝毒素的广谱性免疫层析试纸条。该免疫层析试纸条灵敏性度高、广谱性强，可半定量检测蓝绿藻肝毒素，适用于多种微囊藻毒素类似物和节球藻毒素，且具有快速、直观、易于操作等优势。

公开(公告)号：CN106565737A

公开(公告)日：2017-04-19

申请号：CN201610875386.X

申请日：2016-10-08

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 雷红涛 ,  张雅琼 ,  沈兴 ,  陆宁 ,  徐振林 ,  孙远明 ,  杨金易 ,  肖治理

IPC: C07D493/14 ,  C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K16/02 ,  C07K16/14 ,  G01N33/53

CPC classification number: C07D493/14 ,  C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K16/02 ,  C07K16/14 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种黄曲霉毒素B1半抗原、人工抗原及其高灵敏度、高特异性卵黄抗体的制备方法。本发明首先将黄曲霉毒素B1分子上双呋喃环中的碳碳双键进行加成反应引入游离羧基形成黄曲霉毒素B1半抗原，其结构式如式（I）所示：式（Ⅰ）；再将该半抗原与载体蛋白偶联得到黄曲霉毒素B1人工抗原；由该人工抗原乳化后免疫鸡，得到黄曲霉毒素B1卵黄抗体。所述抗体对黄曲霉毒素B1的半抑制浓度（IC50）为4.23ng/mL，定量检测范围为0.29~61.83ng/mL，检测限为0.06ng/mL，且该抗体对AFB2、AFG1和AFG2的交叉反应率均低于1%。本发明的抗体同时具备高灵敏、特异性的特点，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN119199128A

公开(公告)日：2024-12-27

申请号：CN202411207221.6

申请日：2024-08-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈兴 ,  黄颖茵 ,  郑佳乐 ,  雷红涛 ,  赵岗 ,  李向梅 ,  徐振林

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/533 ,  G01N33/558 ,  G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/682 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/6876 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明具体涉及了一种CRISPR‑免疫联合小分子检测探针制备及其相关检测方法和用途。探针制备主要采用一种化学生物偶联方法，用双功能交联剂4‑（N‑马来酰亚胺甲基）环己烷‑1‑羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐（Sulfo‑SMCC）和N‑琥珀酰亚胺基‑S‑乙酰硫基乙酸酯（SATA），将5’端修饰‑NH2的dsDNA和单克隆抗体共价偶联制备成dsDNA‑抗体探针。其次，本检测方法以dsDNA‑抗体探针作为桥梁将免疫系统和CRISPR/Cas12a系统结合，利用抗体对小分子的特异性识别能力，并借助RPA核酸扩增进行信号放大及CRISPR/Cas12a的顺式切割活性和/或反式单链DNA切割活性产生荧光信号，实现免疫反应信号向高强度荧光信号的转变，建立了CRISPR‑免疫联合小分子检测体系。所述检测方法操作简单、特异性强、灵敏度极高且信号稳定等优点。

公开(公告)号：CN118995944A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411118478.4

申请日：2024-08-15

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈兴 ,  李妍 ,  雷红涛 ,  王璋丽 ,  黄婷婷

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR的虹鳟源性成分引物及检测体系和方法。本发明所述RPA引物和crRNA具有良好的特异性，所构建的鉴别方法呈现双重特异性，对其它物种无特异性识别反应，检测结果准确可靠。同时，本发明所述虹鳟源性成分鉴别方法，操作简便，耗时少，结果准确，适用于有关监督部门对三文鱼产品中虹鳟源性成分的现场快速检测。此外，本发明所述检测方法结合快速碱裂解法提取样品核酸，在不依赖于大型仪器情况下，对三文鱼制品中掺杂的虹鳟源性成分检测限可达1%（w/w），对虹鳟基因组DNA的检测灵敏度为10‑2 ng/μL，适用于多种三文鱼加工产品中虹鳟源性成分鉴别检测，可靠性高。

公开(公告)号：CN118957112A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411143529.9

申请日：2024-08-20

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈兴 ,  谢宇 ,  雷红涛 ,  徐振林 ,  刘艳 ,  朱宇赫

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/38

Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)特异性毒力基因靶标、引物和检测体系及方法。本发明所述靶标序列、RPA引物和crRNA具有良好的特异性，所构建的检测方法对其它亚种无特异性识别反应，检测结果准确可靠。此外，本发明所述检测方法结合煮沸法或试剂盒提取样品DNA，在不进行菌体富集的前提下，对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)基因组DNA的检测灵敏度为10‑4 ng/μL，菌液灵敏度为1.52 CFU/mL。对于椰汁、大米粉和糯米粉进行添标检测，样本检出限均达到100 CFU/mL，样本前处理简单，操作便捷，灵敏度高，可靠性高，适用于相关监管部门对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的现场快速检测。

公开(公告)号：CN116987802B

公开(公告)日：2024-07-23

申请号：CN202310790836.5

申请日：2023-06-29

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 徐振林 ,  李鹏儒 ,  沈兴 ,  徐则珂 ,  孟静南 ,  王涓 ,  罗林 ,  雷红涛

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/085

Abstract: 本发明公开了一种用于检测呕吐型蜡样芽孢杆菌的RPA引物对，所述RPA引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的正向RPA引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示的反向RPA引物。所述引物对以呕吐型蜡样芽孢杆菌毒力基因cesB作为检测靶基因，不会对蜡样芽孢杆菌群组成员及其他食源性致病菌进行非特异性扩增，检测结果准确，具有优异的特异性；同时该RPA引物对呕吐型蜡样芽孢杆菌的基因组DNA检测限为10‑2ng/μL，对菌液的检测限为1.6×102CFU/mL，在增菌2h后检测限能够达到1.6CFU/mL；并且检测过程不依赖于大型仪器，适用于现场快速检测，结果易于观察，极大提高了检测效率。

公开(公告)号：CN117304329A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311154447.X

申请日：2023-09-07

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王弘 ,  方如玉 ,  沈兴 ,  沈玉栋 ,  杨金易 ,  徐振林 ,  孙远明

IPC: C07K16/44 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种提高19‑去甲睾酮纳米抗体表达量及灵敏度的方法，包括以下步骤：将19‑去甲睾酮纳米抗体融合硫氧还蛋白A(TrxA)构建表达载体，并转化至大肠杆菌表达宿主中进行诱导表达，得到菌体中的不溶组分即为纳米抗体包涵体表达组分，并将其包涵体表达组分通过一步法进行变性、复性、纯化和脱盐处理后即可提高其纳米抗体的表达量及灵敏度。本发明不仅能显著提高19‑去甲睾酮纳米抗体的表达量，提高6倍；同时采用一步法进行包涵体柱上复性、纯化及脱盐能明显提高纳米抗体的灵敏度，提高了35.04倍；并通过建立ic‑ELISA方法检测19‑去甲睾酮，其检测限低至0.877pg/mL，灵敏度43.67pg/mL。