公开(公告)号：CN119199128A

公开(公告)日：2024-12-27

申请号：CN202411207221.6

申请日：2024-08-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 沈兴 ,  黄颖茵 ,  郑佳乐 ,  雷红涛 ,  赵岗 ,  李向梅 ,  徐振林

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/533 ,  G01N33/558 ,  G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/682 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/6876 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明具体涉及了一种CRISPR‑免疫联合小分子检测探针制备及其相关检测方法和用途。探针制备主要采用一种化学生物偶联方法，用双功能交联剂4‑（N‑马来酰亚胺甲基）环己烷‑1‑羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐（Sulfo‑SMCC）和N‑琥珀酰亚胺基‑S‑乙酰硫基乙酸酯（SATA），将5’端修饰‑NH2的dsDNA和单克隆抗体共价偶联制备成dsDNA‑抗体探针。其次，本检测方法以dsDNA‑抗体探针作为桥梁将免疫系统和CRISPR/Cas12a系统结合，利用抗体对小分子的特异性识别能力，并借助RPA核酸扩增进行信号放大及CRISPR/Cas12a的顺式切割活性和/或反式单链DNA切割活性产生荧光信号，实现免疫反应信号向高强度荧光信号的转变，建立了CRISPR‑免疫联合小分子检测体系。所述检测方法操作简单、特异性强、灵敏度极高且信号稳定等优点。