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公开(公告)号：CN114107180A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111225743.5
申请日：2021-10-21
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了无透明带体细胞克隆1‑细胞期胚胎聚合及体外培养的方法。采用浓度为0.3％的链霉蛋白酶溶液去除重构胚和去核卵母细胞的透明带，两两一组放入含20％牛血清的洗卵液微滴中，用矿物油覆盖约30min，将1‑细胞期的克隆胚和去核卵母细胞，用自制玻璃吸管轻轻转移至电极宽度为1mm的融合槽中1对1排列，再用自制的拨卵针轻轻将2枚卵拨贴在一起，使2枚卵胞质接触切面与电场方向垂直或近似垂直，也就是组成的“8”字卵正直于两侧电极之间，然后进行融合/聚合，将相互融合的胚胎转入自制的“U型”微滴培养体系中进行培养，体细胞克隆胚胎的卵裂率达到95.7％，囊胚发育率达到69.8％，极大改善了体外克隆重构胚的发育潜力。
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公开(公告)号：CN108004204B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201810072343.7
申请日：2018-01-25
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明提供了一种高通量筛选优质卵母细胞的方法，该方法首先通过成熟液Ⅰ和Ⅱ让卵母细胞在体外培养环境达到成熟，再通过脱卵丘溶液进行脱卵丘细胞，同时对卵母细胞的细胞膜结构的完整性进行初选，半透膜结构不完整的卵母细胞不会出现卵周隙，在此过程中可以淘汰一部分劣质卵母细胞；最后在等渗无激素溶液中复选，如果初选的卵母细胞的细胞膜不能恢复到脱卵丘溶液处理之前的状态，则这种卵母细胞也必须淘汰，从而可快速高通量筛选出优质卵母细胞，用于生产性克隆工作的开展。
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公开(公告)号：CN111926037A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010876990.0
申请日：2020-08-27
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 , 中国科学院亚热带农业生态研究所 , 湖南惠生农业科技开发股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/113 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法。所述制备方法包括：设计sgRNA寡聚核苷酸链；将sgRNA寡聚核苷酸链通过程序性退火得到含黏性末端的退火后的sgRNA双链；将退火后的sgRNA双链与酶切处理后的PX459-puro载体连接得到PX459-puro-sgRNA质粒。本发明提供的质粒的制备方法简单有效，敲除MSTN基因的方法则可以有效敲除MSTN基因，提高桃源黑猪仔猪的生长速率。
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公开(公告)号：CN105853021B
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201610152282.6
申请日：2016-03-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: A61B10/02
Abstract: 本发明涉及一种微型采精设备及其采集方法，适于动物繁殖中使用。本发明的微型采精设备在包括采精管、控温器、集精管、导管、真空泵、节律器，本发明的真空泵、节律器通过导管连接集精管。通过真空泵、节律器模拟雌性动物体内的搏动，通过导管传递真空泵产生的负压到集精管，通过真空泵模拟雌性动物体内的负压，解决了对小型动物采精的难题。本发明操作简单，不损伤动物，且采集速度较快。
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公开(公告)号：CN107328947A
公开(公告)日：2017-11-07
申请号：CN201710728980.0
申请日：2017-08-22
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: G01N35/00 , A23K50/30 , A23K20/158 , A23K10/22 , A23K20/174
CPC classification number: G01N35/00 , A23K10/22 , A23K20/158 , A23K20/174 , A23K50/30
Abstract: 本发明公开了一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，涉及转基因猪检测领域。本发明公开的转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其包括：检测转fat-1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。该评价方法可以对转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物对转基因猪的生长性能的影响进行准确、可靠地评价，有助于在转fat-1基因猪育种过程中准确控制fat-1基因表达。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106086031A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610431774.9
申请日：2016-06-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
CPC classification number: C07K14/495 , C12N15/85 , C12N2800/107 , C12N2800/80
Abstract: 本发明公开了猪基因组中猪肌抑素基因编辑位点及其应用，属于生物技术和生物医学工程领域。本发明从猪肌抑素基因编码区中分离出1个基因编辑靶位点，其序列为5’‑GGCTGTGTAATGCATGTATGTGG‑3’，位于MSTN编码区1号外显子。该位点能被Cas9核酸内切酶特异性识别，从而介导双链断裂，然后和打靶载体发生同源重组，将突变基因或选择性标记基因等整合至受体细胞基因组的预定位点。统计结果表明，该位点打靶效率为80.5％。本发明提供的猪肌抑素基因编辑位点，为对该基因进行精确编辑提供了有效的靶标，为研制高瘦肉率的生猪新品种提供了新策略，也为探明肌抑素的分子机制和信号通路提供了可靠的手段和素材。
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公开(公告)号：CN119570784A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411665414.6
申请日：2024-11-20
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种靶向敲除猪ATP11C基因的sgRNA、sgRNA组合物、载体及应用，属于生物技术领域。该sgRNA为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3、sgRNA4、sgRNA5、sgRNA6中的任一种。本发明针对猪ATP11C基因靶点，设计特异性靶向敲除猪ATP11C基因的sgRNA，从而高效、精准对猪ATP11C基因进行特异性敲除，并且得到稳定敲除ATP11C基因的猪肾成纤维细胞，并且，敲除ATP11C基因后显著抑制猪肾成纤维细胞的增殖，这为通过体细胞克隆技术生产具有相关疾病模型特征的克隆猪奠定了坚实基础，进而为与ATP11C相关的疾病治疗等研究提供了有利的实验材料。
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公开(公告)号：CN119432850A
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202411532090.9
申请日：2024-10-30
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统敲除猪E4F1基因的方法，属于基因编辑技术领域；该方法利用特异性靶向猪E4F1基因的sgRNA组合物(一对sgRNA)，构建包含上述sgRNA的CRISPR/Cas9基因敲除载体，再利用上述载体进行猪E4F1基因敲除。本发明方法能够实现猪E4F1基因的高效率敲除，进而显著提高E4F1基因敲除细胞和E4F1基因敲除猪的构建效率，为猪E4F1基因的功能研究及其应用提供了有效方法和基础。
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公开(公告)号：CN118240823A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410322073.6
申请日：2024-03-20
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 , 湖南楚沩香农牧股份有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/11 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种用于敲除猪CD163、MSTN基因的sgRNA组合物、载体及其应用，属于生物医学技术领域。本发明通过分别对猪CD163、MSTN基因设计基因编辑双靶位点，该靶位点均能被Cas9核酸内切酶特异性识别，从而介导双链断裂，在自我修复系统的作用下通过非同源末端连接的方式使基因发生突变，然后设计sgRNA组合物，并且以tRNA‑sgRNA‑sgRNA scaffold为最小重复单元，利用PTG/Cas9策略构建Cas9‑CD163‑MSTN多顺反子载体，从而实现了高效、精准地敲除靶基因，因此，在猪种质改良中具有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN117210506A
公开(公告)日：2023-12-12
申请号：CN202311173216.3
申请日：2023-09-12
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/87 , C12N15/113 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种小干扰RNA高效转染卵母细胞的方法，具体为：将卵母细胞置于纳米电穿孔缓冲液中进行电击，其中所述纳米电穿孔缓冲液为包括siRNA、纳米多肽的卵母细胞培养液。本发明方法保留了透明带，对卵母细胞后续发育潜能无影响，通过电穿孔和纳米多肽的协同作用，实现了较高的干扰效率，操作流程简单且时间短成本低。本发明建立的卵母细胞siRNA转染方法，极大地提高了生殖生物学和动物繁殖学相关领域研究人员的工作效率，减少对仪器和人员的依赖，减低成本，具有良好的应用前景。
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