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公开(公告)号：CN106086031B
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201610431774.9
申请日：2016-06-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了猪基因组中猪肌抑素基因编辑位点及其应用，属于生物技术和生物医学工程领域。本发明从猪肌抑素基因编码区中分离出1个基因编辑靶位点，其序列为5’‑GGCTGTGTAATGCATGTATGTGG‑3’，位于MSTN编码区1号外显子。该位点能被Cas9核酸内切酶特异性识别，从而介导双链断裂，然后和打靶载体发生同源重组，将突变基因或选择性标记基因等整合至受体细胞基因组的预定位点。统计结果表明，该位点打靶效率为80.5％。本发明提供的猪肌抑素基因编辑位点，为对该基因进行精确编辑提供了有效的靶标，为研制高瘦肉率的生猪新品种提供了新策略，也为探明肌抑素的分子机制和信号通路提供了可靠的手段和素材。
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公开(公告)号：CN107603983A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710796222.2
申请日：2017-09-06
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/90 , C12N15/89
Abstract: 本发明公开了一种小鼠RBM10基因编辑位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，以pDR274载体为骨架构建插入有小鼠RBM10基因编辑靶位点T1、T2的Cas9 gRNA表达载体，可高效敲除小鼠RBM10基因的编辑位点T1、T2。这两个编辑位点可用于Cas9介导的小鼠RBM10基因打靶，制备RBM10基因修饰小鼠本发明鉴定小鼠RBM10基因的高效编辑位点，并分析其打靶效率，为构建RBM10基因内源性敲除或定点敲入外源基因的转基因小鼠提供新途径。
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公开(公告)号：CN105853021A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610152282.6
申请日：2016-03-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: A61D19/02
CPC classification number: A61D19/021
Abstract: 本发明涉及一种微型采精设备及其采集方法，适于动物繁殖中使用。本发明的微型采精设备在包括采精管、控温器、集精管、导管、真空泵、节律器，本发明的真空泵、节律器通过导管连接集精管。通过真空泵、节律器模拟雌性动物体内的搏动，通过导管传递真空泵产生的负压到集精管，通过真空泵模拟雌性动物体内的负压，解决了对小型动物采精的难题。本发明操作简单，不损伤动物，且采集速度较快。
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公开(公告)号：CN103509752A
公开(公告)日：2014-01-15
申请号：CN201310381274.5
申请日：2013-08-28
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073 , C12N15/873 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，利用妊娠35天的湖北白猪胎儿，经机械剪切和胰酶消化，通过原代培养、传代培养、液氮冻存、细胞复苏，最终获得形态均一、生长旺盛的湖北白猪胎儿成纤维细胞系，保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.C201331。本发明得到的湖北白猪胎儿成纤维细胞系纯度高，形态一致，无上皮细胞、肝脏细胞、心肌细胞等的混杂。本发明所建细胞系可为基因工程、细胞工程、胚胎工程、免疫学和分子生物学提供高品质的细胞素材；可作为猪体细胞核移植的供体细胞；是重要的基因资源库，可作为优良地方品种的保种手段之一。
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公开(公告)号：CN103382442A
公开(公告)日：2013-11-06
申请号：CN201310289740.7
申请日：2013-07-11
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12M1/42
Abstract: 本发明涉及克隆哺乳动物用的半固定半移动电融合电极，适于克隆哺乳动物中重构卵融合用。本发明通过转动调节柄调节移动电极的角度和移动电极把重构的细胞在固定电极和移动电极的前端之间进行微调，使重构的细胞排列方向垂直于固定电极以及移动电极的前端。本发明大大减少了克隆胚的体外操作时间并提高了其电融合效率，从而在电融合环节上提高了细胞核移植的成功率，而且操作简便快捷，电极的制作方便简单。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102796736A
公开(公告)日：2012-11-28
申请号：CN201210276350.1
申请日：2012-08-03
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了猪基因组假attP位点及其应用，属于生物技术和生物医学工程领域。本发明从猪基因组中分离到1个假attP位点，与野生型attP位点有40%的序列相似度，具有回文序列特征。该位点能被链霉菌噬菌体фC31整合酶所识别，从而介导含attB位点的外源基因以较高的效率整合于此位点。经蛋白含量测定，该位点维持EGFP基因的表达水平是无外源基因组的50倍。本发明为猪转基因的定点整合与高效表达提供了新的技术方案，为猪功能基因组研究提供了新策略，因此具有重要的科学价值和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102080075A
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN201010582369.X
申请日：2010-12-10
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种不含有人工碱基的无缝基因克隆方法，步骤有:i)根据目的基因和目标载体的序列，设计、合成嵌合体引物；ii)实施一步二元式搭桥耦联长距离PCR,获得融合线性片段；iii)DpnI消化PCR产物,去除带甲基化的模板质粒DNA;iv)转化大肠杆菌菌株DH5α；v)挑取单克隆菌落测序鉴定；vi)酶切确认重组质粒的整合情况。该方法不需要特殊的限制性内切酶和连接酶以及碱性磷酸酶，而且可以将任意目的基因融入任意目标载体的任意位置。该方法原理简单，操作简便，位点精确可控，阳性率高，适用范围广。
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公开(公告)号：CN110923297A
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201911020889.9
申请日：2019-10-25
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6816
Abstract: 本发明公开了一种检测猪基因组脱靶整合风险的方法。本发明即是通过改进技术条件得到一种能够检测猪基因组目标基因脱靶整合的方法(简称QPS法)，包括目标基因在猪基因组内源基因座定位整合检测、改进的Q-PCR法检测基因整合拷贝数、Southern blot杂交分型检测目的基因在猪基因组中整合状况，评价目的基因脱靶整合风险。该发明能够及时改进实验条件得到无目标基因脱靶整合细胞系，在优化实验条件下用体细胞克隆或显微注射法制备转基因猪，得到的转基因阳性猪不会产生目标基因脱靶整合风险。提高转基因猪育种质量，能够加快转基因猪商品化生产进程。
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公开(公告)号：CN107603983B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201710796222.2
申请日：2017-09-06
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/90 , C12N15/89
Abstract: 本发明公开了一种小鼠RBM10基因编辑位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，以pDR274载体为骨架构建插入有小鼠RBM10基因编辑靶位点T1、T2的Cas9 gRNA表达载体，可高效敲除小鼠RBM10基因的编辑位点T1、T2。这两个编辑位点可用于Cas9介导的小鼠RBM10基因打靶，制备RBM10基因修饰小鼠本发明鉴定小鼠RBM10基因的高效编辑位点，并分析其打靶效率，为构建RBM10基因内源性敲除或定点敲入外源基因的转基因小鼠提供新途径。
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公开(公告)号：CN107365738B
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201710667052.8
申请日：2017-08-07
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了一种奶牛与黄牛体外受精胚胎的制备方法。方法中采用屠宰场废弃的奶牛卵巢，经过温度递增式的生理盐水梯度洗涤，抽取其中的卵母细胞进行体外成熟培养，获得高质量的体外成熟培养的卵母细胞；高产奶牛精子解冻后置入受精液中用移液枪轻轻吹打后，上下颠倒几次，于培养箱中上浮，进行体外受精，制备高产奶牛与黄牛体外受精胚胎。本发明采用屠宰场废弃的卵巢获得卵母细胞，提高了母牛资源的利用率。并且通过技术细节的改进，获得了较好的效果。利用本发明能够大幅度提高优良种公畜的利用率，使优良种公畜获得大量的后代，从而扩大其在畜群遗传改良中的作用。
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