公开(公告)号：CN107937619B

公开(公告)日：2020-08-04

申请号：CN201711497886.5

申请日：2017-12-29

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 肖琦 ,  何孔旺 ,  茅爱华 ,  汪伟 ,  俞正玉 ,  郭佳慧 ,  温立斌 ,  胡屹屹 ,  朱雪蛟 ,  李彬 ,  郭容利 ,  范宝超 ,  周萍 ,  曲梦 ,  倪艳秀 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  王丹丹 ,  张雪寒 ,  张碧成 ,  吕立新 ,  沈江萍

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供一种用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物及其应用，涉及生物技术领域。用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供以非诊断为目的的检测猪圆环病毒3型的方法，以待检样品中提取的总DNA为模板，采用权利要求1‑3之一所述引物组合物进行PCR扩增，从而确定待检样品中是否存在猪圆环病毒3型。采用本发明引物组合物及检测方法，能够快速、准确、灵敏的检测出样品中是否存PCV3。

公开(公告)号：CN106754592B

公开(公告)日：2019-11-01

申请号：CN201611050768.5

申请日：2016-11-25

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  王勇 ,  祝昊丹 ,  倪艳秀 ,  周俊明 ,  张雪寒 ,  俞正玉 ,  肖琦 ,  张碧成

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  A61K39/09 ,  A61P31/04 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明提供猪链球菌2型Rex基因敲除突变株及其构建方法和应用，属于基因工程领域。突变株SS2‑1ΔRex，是将SS2‑1株基因组中Rex编码基因敲除后获得的。突变株SS2‑1ΔRex的构建方法：构建含有同源重组片段的基因敲除质粒 pSET4s::Rex，将 pSET4s::Rex电转化入SS2‑1株内，同源重组，采用抗性筛选；所述同源重组片段的两侧为SS2‑1株基因组中Rex编码基因上、下游片段，中间为抗性基因片段。突变株SS2‑1ΔRex，毒力较亲本株显著降低，构建方法简单、高效，突变株SS2‑1ΔRex的活疫苗，仅需接种两次，就能够有效控制SS2的感染，没有明显的毒副反应。

公开(公告)号：CN108950033A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810831206.7

申请日：2018-07-26

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  葛东红 ,  张碧成 ,  王警 ,  郭芸芸 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  汪伟 ,  胡屹屹 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  肖琦 ,  范宝超 ,  朱雪娇

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明提供同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用，涉及出血性大肠杆菌的检测技术领域。该试剂盒，包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括序列如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示的引物；所述第二引物对包括序列如SEQ ID No：7和SEQ ID No：8所示的引物。本发明还提供所述纳米PCR试剂盒在以非诊断为目的检测肠出血性大肠杆菌O45和O145中的应用。本发明纳米PCR试剂盒，能够快速、特异的同时检测样品中两种血清型的EHEC，具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN105061602B

公开(公告)日：2018-04-13

申请号：CN201510481575.4

申请日：2015-08-03

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  俞正玉 ,  张强 ,  张碧成 ,  汪伟 ,  茅爱华 ,  周俊明 ,  何孔旺 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  周萍

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold I质粒，得到重组载体；将所述重组载体转化宿主细胞，获得阳性重组菌；诱导所述阳性重组菌表达融合蛋白，纯化后得到所述融合蛋白。本发明融合蛋白，免疫反应性良好，产量较高，可以用于同时检测抗F4和F5型猪产肠毒素性大肠杆菌抗体。本发明试剂盒方面，检测准确、操作简便，特异性、敏感性、重复性均良好，适合于在临床应用中进行推广，为抗ETEC抗体的快速检测提供了可靠手段。

公开(公告)号：CN103865859B

公开(公告)日：2015-10-21

申请号：CN201410130127.5

申请日：2014-04-02

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 吕立新 ,  何孔旺 ,  倪艳秀 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周俊明 ,  张雪寒 ,  郭容利 ,  李彬 ,  温立斌 ,  王小敏 ,  汪伟

IPC: C12N1/20 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04 ,  C12R1/44

Abstract: 本发明提供一株松鼠葡萄球菌、疫苗及其制备方法，属生物技术领域。本发明提供松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）NJ1306，保藏号为CCTCC NO: M 2013702。试验证明松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）NJ1306对BALB/c小鼠和仔猪都有致病性。本发明还提供松鼠葡萄球菌灭活疫苗，含有灭活的NJ1306株。将灭活的松鼠葡萄球菌培养液和佐剂混合均匀，得到松鼠葡萄球菌灭活油乳剂疫苗。采用本发明松鼠葡萄球菌NJ1306制成的灭活油乳剂疫苗，可以对BALB/c小鼠提供很好的保护力，说明该菌株具有良好的免疫原性。

公开(公告)号：CN104777312A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201510098638.8

申请日：2015-03-05

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李彬 ,  孙冰 ,  何孔旺 ,  杜露平 ,  郭容利 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  俞正玉 ,  张雪寒 ,  茅爱华 ,  吕立新 ,  胡屹屹 ,  周俊明 ,  王小敏 ,  祝昊丹 ,  于洋

IPC: G01N33/68

CPC classification number: G01N33/56983 ,  G01N2333/17

Abstract: 本发明提供了一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒是以纯化的重组猪传染性胃肠炎病毒N蛋白作为包被抗原的ELISA板条，还包括洗涤液、血清稀释液、底物显色液、羊抗猪酶标二抗、终止液、TGEV阳性血清和TGEV阴性血清。本发明试剂盒用于检测猪传染性胃肠炎病毒的抗体，经检验，该试剂盒特异性、敏感性、重复性均良好，检测准确、操作简便，适合于在临床应用中进行推广，为猪传染性胃肠炎病的快速检测提供了可靠手段。

公开(公告)号：CN104730246A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510048127.5

申请日：2015-01-29

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  李盟 ,  汪伟 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  周俊明 ,  王小敏 ,  周萍

IPC: G01N33/577

CPC classification number: G01N33/56916

Abstract: 本发明公开了检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒，包括酶标板、单抗、酶标试剂、底物显色液、终止液、阳性标准抗原、阴性标准品、10×洗涤液，酶标板为包被有大肠杆菌O157:H7全菌抗原的兔抗血清的96孔板，单抗为EO06。本发明试剂盒通过制备紧密素多肽抗原，免疫获得高滴度和高亲和力的单克隆抗体，用于研制夹心ELISA方法，提高检测敏感性和特异性。

公开(公告)号：CN104498623A

公开(公告)日：2015-04-08

申请号：CN201410696032.X

申请日：2014-11-26

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 倪艳秀 ,  何孔旺 ,  郭容利 ,  李彬 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  吕立新 ,  祝昊丹 ,  周俊明 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  王小敏 ,  汪伟 ,  胡屹屹

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2600/16 ,  C12Q2537/143

Abstract: 本发明涉及猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株鉴别诊断用引物及其检测试剂盒，属于生物技术领域。以总RNA为模板，利用鉴别诊断猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的检测引物进行RT-PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，为猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的鉴别诊断提供了保证。

公开(公告)号：CN103255171A

公开(公告)日：2013-08-21

申请号：CN201310072085.X

申请日：2013-03-07

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 王小敏 ,  何孔旺 ,  汪伟 ,  周忠涛 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  李彬 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  叶青 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N15/866 ,  A61K48/00 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及猪圆环病毒（PCV）2型密码子优化的ORF2基因重组杆状病毒病毒样粒子，属于生物制药领域。将所有PCV2ORF2序列进行比对分析，得到人工合成的密码子优化的PCV2ORF2序列，命名为YHsfORF2。将YHsfORF2克隆、转染，获得重组杆状病毒vFBHYHsfORF2。密码子优化的ORF2基因能够在重组病毒中高效表达，并能形成病毒样颗粒。本发明还涉及该重组病毒在疫苗方面的应用，动物免疫保护试验表明该重组病毒灭活疫苗，可刺激机体产生高效的免疫应答，有效抑制PCV2在动物体内的复制，对PCV2感染有较好的免疫预防保护作用。

公开(公告)号：CN101948792B

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201010118490.7

申请日：2010-03-05

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  卢维彩 ,  赵攀登 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  王小敏 ,  倪艳秀 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C07K14/245 ,  A61K39/108 ,  A61K39/116 ,  A61P31/04

CPC classification number: Y02A50/472

Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7增强粘膜免疫多价融合型重组菌、重组蛋白制备方法及基因工程疫苗，属于生物制药领域。分别扩增出EHEC O157:H7的志贺毒素1和2的B亚基(Stx1B和Stx2B)、转位紧密素受体(Tir)，依次串联，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，而后将霍乱弧菌封闭小带毒素(zot)串联其后，即获得重组质粒pGEX-4T-1-2b-tir-1b-zot，在BL21(DE3)获得高效表达。经过高密度发酵和一系列的纯化程序获得高纯度的融合蛋白分子疫苗。该疫苗的制备工艺简捷、易于放大、重复性好，所获得目标蛋白纯度较高，动物试验证明可刺激机体在体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫方面产生高效的免疫应答，免疫预防保护和治疗作用。