公开(公告)号：CN112877303A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110332462.3

申请日：2021-03-29

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  曹诗雅 ,  谢泉 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/861 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N15/62 ,  C12N15/90 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种EGFP与Fiber‑2融合表达的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，本发明的原理和最核心的关键技术是选择合适插入位点以及sgRNA。插入RFP后进行病毒的纯化，获得可以稳定扩增的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入外源基因RFP，成功获得了表达RFP的重组FAdV‑4病毒，由此可见，RFP的插入位置可以作为插入其他病原的保护性抗原插入位点，为构建FAdV‑4重组多价苗提供了夯实的理论基础。

公开(公告)号：CN112710832A

公开(公告)日：2021-04-27

申请号：CN202011533179.9

申请日：2020-12-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  谢松桦 ,  王萍 ,  王伟康 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  李拓凡

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明提供了一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条，涉及禽类疾病诊断技术领域，包括底板和依次搭建于底板上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫，所述金标垫上喷绘有金标抗体，所述硝酸纤维素膜上喷绘有检测线和质控线；所述金标抗体为杂交瘤细胞株5A3制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的金标的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体5A3；所述检测线上喷绘有检测抗体，所述检测抗体为杂交瘤细胞株1D7制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体1D7。采用本发明提供的试纸条能够准确地检测禽类是否感染FAdV‑4，准确率达到100％。

公开(公告)号：CN105037503B

公开(公告)日：2016-12-21

申请号：CN201510357985.8

申请日：2015-06-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  田晓彦 ,  施洋洋 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  谢泉 ,  夏驰超 ,  周晓祥 ,  范中雷

IPC: C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN105779649A

公开(公告)日：2016-07-20

申请号：CN201610186635.4

申请日：2016-03-29

Applicant: 扬州大学 ,  国药集团扬州威克生物工程有限公司

Inventor： 叶建强 ,  谢泉 ,  张建军 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  钱琨 ,  高巍 ,  万志敏

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12Q1/702 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2545/113

Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒。所述试剂盒包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、Fast Master混合液和Universal qPCR反应液。本发明利用生物素标记的抗禽白血病病毒特异性抗体以及商品化邻位连接试剂，通过免疫PCR检测样品中禽白血病病毒抗原。实现不用对样品进行繁琐的核酸提取过程，通过PCR方法对禽白血病病毒抗原进行快速高通量检测。这一检测禽白血病病毒免疫PCR试剂盒将应用于禽白血病病毒临床检测与净化中，将填补国内外相关技术空白。

公开(公告)号：CN118894915A

公开(公告)日：2024-11-05

申请号：CN202411032283.8

申请日：2024-07-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王胜男 ,  苗田田 ,  罗毅 ,  武佳妍 ,  李璟雯 ,  李拓凡 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  叶建强

IPC: C07K14/465 ,  C12N15/70 ,  C12N15/12 ,  C07K16/06 ,  C07K16/18 ,  C07K19/00 ,  G01N33/68 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可溶性鸡源PML蛋白及其高效原核表达方法和应用，所述PML蛋白命名为PML‑P2，如SEQ ID NO:1所示。本发明筛选的蛋白PML‑P2不仅高效表达，其融合蛋白免疫小鼠产生的多抗血清，不仅能够与鸡源PML发生特异性反应，还能有效识别人、犬的细胞中内源性PML蛋白，表现出优异的广谱反应性，同时该多抗血清还能在免疫沉淀试验中高效地将外源高表达的鸡PML蛋白进行免疫沉淀。本发明表达载体构建及纯化的PML‑P2融合蛋白将为探究鸡源PML生物学功能及其在疾病中的作用提供有效的免疫学试剂，也为其他物种相关生物学研究提供了有效生物学材料。

公开(公告)号：CN118879777A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202410983164.4

申请日：2024-07-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李拓凡 ,  王泽铭 ,  相汝苹 ,  武佳妍 ,  王胜男 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  叶建强

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/54 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9敲除鸡EphrinA2基因的细胞系的构建方法，包括如下步骤：设计特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA；构建含有Cas9蛋白基因和特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA的敲除质粒；对细胞进行转染，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因沉默，随后通过亚克隆获得鸡源EphrinA2敲除细胞。本发明获得鸡源EphrinA2基因敲除的细胞模型，不仅方法成本低、效率高、简单易用，并且所构建的敲除鸡EphrinA2基因细胞系细胞活性显著降低，为解析EphrinA2在鸡体内中的功能作用及其在某些病毒入侵宿主中的作用与机制提供帮助。

公开(公告)号：CN118240780A

公开(公告)日：2024-06-25

申请号：CN202410361186.7

申请日：2024-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汤也 ,  武佳妍 ,  蒋蕙如 ,  聂雨晴 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，禽传染性法氏囊病毒新型变异株的VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，使用禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的838位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用目前流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因，成功获得了表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为研发禽传染性法氏囊病毒和血清4型禽腺病毒的二联疫苗提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN118048323A

公开(公告)日：2024-05-17

申请号：CN202410380705.4

申请日：2024-03-31

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汤也 ,  汤婷 ,  万志敏 ,  蒋蕙如 ,  刘时 ,  姜文杰 ,  马也 ,  聂雨晴 ,  谢泉 ,  李拓凡 ,  叶建强

IPC: C12N7/01 ,  C12N7/02 ,  C07K14/11 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/861 ,  C12N15/44 ,  C12N15/12 ,  A61K39/145 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/16 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达H10N3禽流感病毒禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，为基于CRISPR‑Cas9技术表达H10N3禽流感病毒禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒；所述的H10N3禽流感病毒HA蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；所述的重组血清4型禽腺病毒，其中使用H10N3禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明构建的表达H10N3禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为制备血清4型禽腺病毒和H10N3禽流感病毒二联疫苗奠定了基础。因此，本发明具有一定的市场应用价值。

公开(公告)号：CN117603920A

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202311597478.2

申请日：2023-11-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  刘时 ,  汤也 ,  谢泉 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C07K14/075 ,  C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N15/34 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  A61P1/16 ,  A61P9/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明以FAdV‑4为病毒载体，通过CRISPR/Cas9技术和Cre‑loxP重组系统，构建一株靶向敲除FAdV‑4的Fiber‑2蛋白同时表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的重组禽腺病毒。该重组禽腺病毒不仅能够稳定表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白，而且通过生长曲线测定较血清4型禽腺病毒复制快，效价高，有望对疫苗的生产减少成本。动物试验还表明灭活的重组禽腺病毒FAdV4‑F11能够有效诱导鸡体内针对血清11型禽腺病毒和FAdV4的中和抗体，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和血清11型禽腺病毒提供技术支撑和疫苗候选。

公开(公告)号：CN117511888A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311497753.3

申请日：2023-11-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张俊 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  秦爱建

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/34 ,  A61K39/12 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，其中使用鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株含VP2基因的全编码区替换FAdV‑4的Fiber‑2基因，替换的是FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入含鸡传染性贫血病病毒VP2基因的全编码以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒。