动物细胞内核蛋白提取方法

    公开(公告)号:CN102277402B

    公开(公告)日:2013-07-03

    申请号:CN201110204137.5

    申请日:2011-07-20

    Abstract: 本发明公开了一种动物细胞内核蛋白提取方法。该方法通过利用细胞穿透肽、外源核蛋白和绿色荧光蛋白共同构建重组核蛋白表达载体,介导重组核蛋白在细胞核内表达,待重组核蛋白在细胞内表达稳定后,使用操作液处理细胞,收集细胞,超声波破碎,离心去沉淀后收集细胞上清液,上清液过滤除菌后添加到细胞培养液中,4h后提取的荧光标记外源重组核蛋白通过细胞质进入细胞核并定位于细胞核内。利用该方法提取的核蛋白能够发挥蛋白功能使细胞发生形态特征的改变,结果证实本发明能够简单、快速、高效地提取具有生物活性的细胞内核蛋白。

    胚胎免疫荧光染色操作皿及其制备方法

    公开(公告)号:CN103115812A

    公开(公告)日:2013-05-22

    申请号:CN201310022665.8

    申请日:2013-01-22

    Abstract: 本发明公开了胚胎免疫荧光染色操作皿及其制备方法。胚胎免疫荧光染色操作皿包括操作皿和以琼脂糖凝胶制成的底衬;底衬贴附在操作皿的内腔底面,底衬上表面设有凹坑。其中,凹坑为半圆形。制备方法是(1)将设有半圆形凸起的模具固定在培养皿的上盖内腔的顶面;(2)用琼脂糖粉末与水或DPBS/PBS溶液制成琼脂糖凝胶;(3)将琼脂糖凝胶倒入培养皿,使模具上的半圆形凸起与琼脂糖凝胶的液面接触;(4)待琼脂糖凝胶凝固后取下模具,即可使用;也可盖上盖子封好后4℃保存待用。本发明在组织培养皿中设置以琼脂糖凝胶制成底衬,使得胚胎免疫荧光染色操作直接在底衬上完成,避免了操作中胚胎与组织培养皿板壁发生直接接触而产生的粘连、变形、移位和窜孔等问题。

    乳腺特异表达人杀菌通透性增强蛋白载体构建方法

    公开(公告)号:CN102676581A

    公开(公告)日:2012-09-19

    申请号:CN201210100640.0

    申请日:2012-04-07

    Abstract: 本发明公开了一种乳腺特异表达人杀菌通透性增强蛋白载体构建方法,属于生物工程技术领域。体外合成包括目的基因hBPI的CDS序列,该CDS序列上游添加了XhoI酶切位点、Kozak序列、牛β-酪蛋白信号肽,下游添加了XhoI酶切位点;并将此体外合成序列定向克隆至经XhoI酶切的pBC1-loxp-neo-loxp-pBD载体;经菌液PCR和测序验证,获得了构建正确的人杀菌/通透性增强蛋白乳腺特异表达载体pBC1-loxp-Neo-loxp-hBPI。本发明经细胞C-127水平的功能验证表明该载体基因构建合理、有效,这将为成功制作动乳腺生物反应器生产hBPI蛋白奠定了坚实的基础。

    猪卵丘干细胞的分离方法
    40.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102268404A

    公开(公告)日:2011-12-07

    申请号:CN201110204169.5

    申请日:2011-07-20

    Abstract: 本发明公开了一种猪卵丘干细胞的分离方法。其方法是抽取青年母猪卵丘卵母细胞复合物,卵母细胞体外成熟培养后,消化脱离卵丘细胞,收集消化的卵丘细胞进行培养,待有细胞集落出现并形成较大的细胞集落后,消化传代接种到饲养层上,在含有细胞因子的培养液中进行培养,分离培养的卵丘干细胞具有鸟巢状细胞生长形态,细胞圆形、核较大,细胞表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog、SSEA1,体外分化能够形成来源于三个胚层的神经细胞、肌肉细胞和肝脏细胞,结果显示从猪卵丘细胞中分离培养了卵丘干细胞。

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