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公开(公告)号：CN112941107A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110365085.3
申请日：2021-04-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN111961686A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010888329.1
申请日：2020-08-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统。构建CRISPR/Cas9表达载体、PiggyBac系统介导的供体载体以及PiggyBac转座酶表达载体，通过CRISPR/Cas9表达载体打靶基因组，造成DNA双链断裂，使用PiggyBac系统介导的供体载体进行HDR修复，再利用PiggyBac转座酶表达载体进行筛选标记的删除，从而实现高效、精确的双等位无筛选标记的基因组编辑，可应用于畜禽转基因育种。
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公开(公告)号：CN107760707B
公开(公告)日：2020-05-19
申请号：CN201710381327.1
申请日：2017-05-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒的建立，通过优化UAS数目及GAL4激活/结合域类型，找到一种增强效果较好的表达盒，由自身强启动子CMV启动，借助Gal4/UAS系统使转录和翻译效率提高，从而产生自动激活、级联放大的效果；在转染后第5‑10天维持较高的增强效果，第8天表达活性最高，说明表达盒增强基因表达的稳定性；在专门生产重组蛋白的CHO细胞中，增强效果大概是9倍。与现有基因表达盒相比，结构简单、增强效果显著，为基因治疗的非病毒转染途径和重组蛋白生产中增强目的基因表达提供了一种途径和新方法。
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公开(公告)号：CN106755049B
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201611020358.6
申请日：2016-11-14
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种基于人工核酸酶的可视化细胞修复效率报告系统及其建立方法，包括由插入有目的基因靶位点的报告基因I表达盒、完整的报告基因II表达盒以及报告基因I的截短序列构建的双荧光报告系统表达载体，本发明所述基于人工核酸酶的可视化细胞修复效率报告系统利用并模拟真核细胞内的不同修复机制对报告系统中的相应的荧光表达盒进行修复，可通过流式细胞仪对双荧光报告系统表达载体两种报告基因的表达进行量化，在载体水平一次性报告检测真核细胞中某一确定基因位点HR、SSA和NHEJ的修复效率。
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公开(公告)号：CN106191116A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610703246.4
申请日：2016-08-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明提供基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用，系统包括同时具有报告/供体功能的载体及Cas9表达载体，所述报告/供体载体包括两条目标基因同源臂以及位于两条目标基因同源臂之间的外源序列片段；两条目标基因同源臂在目标基因上的同源序分别列位于目标基因靶序列的两侧并与目标基因靶序列相接；外源序列片段包括依次排列的启动子、抗性基因、剪切肽序列、报告基因以及polyA尾，抗性基因内部插入有两段该抗性基因的SSA修复同源序列，并且在两段SSA修复同源序列之间插入有目标基因靶序列。本发明构建了一套能够高效定点精确靶向整合外源基因到內源基因序列的敲入系统，而且能够进行较高效率的双染色体等位基因的双敲入。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118497232A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410457560.3
申请日：2024-04-16
Applicant: 西北农林科技大学 , 新疆畜牧科学院畜牧研究所
IPC: C12N15/55 , C12N15/113 , C12N15/85 , A01K67/0275
Abstract: 本发明公开了一种融合核酸外切酶的CRISPR/Cas12i基因编辑衍生系统及其应用，通过XTEN序列将核酸外切酶T5EXO与高保真核酸内切酶hfCas12Max融合，并通过筛选T5EXO和XTEN序列的分子组合，实现了利用hfCas12Max与T5EXO融合表达提高CRISPR/Cas12i系统介导的基因编辑的效率。本发明利用对Cas12i的衍生改造所获得的CRISPR/Cas12i‑T5EXO基因编辑系统具有更高的编辑效率，可以在绵羊遗传育种等方面发挥更广泛的应用价值。
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公开(公告)号：CN111961686B
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202010888329.1
申请日：2020-08-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统。构建CRISPR/Cas9表达载体、PiggyBac系统介导的供体载体以及PiggyBac转座酶表达载体，通过CRISPR/Cas9表达载体打靶基因组，造成DNA双链断裂，使用PiggyBac系统介导的供体载体进行HDR修复，再利用PiggyBac转座酶表达载体进行筛选标记的删除，从而实现高效、精确的双等位无筛选标记的基因组编辑，可应用于畜禽转基因育种。
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公开(公告)号：CN112941107B
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202110365085.3
申请日：2021-04-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN111876422B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202010778704.7
申请日：2020-08-05
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/65 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种可用于富集CRISPR/Cas9介导的精确NHEJ修复细胞的筛选报告系统，包括精确NHEJ修复筛选报告载体以及与该筛选报告载体共转染于目标编辑细胞的细胞基因组长片段打靶载体，精确NHEJ修复筛选报告载体包括筛选报告基因表达盒及两个sgRNA表达盒，所述筛选报告基因表达盒的转录区包括用于插入在药物筛选基因序列选定隔断位置的双sgRNA靶位点构建序列，双sgRNA靶位点分别以两个sgRNA表达盒转录的sgRNA作为打靶筛选报告基因表达盒的导引序列。本发明的筛选报告系统通过共转染并进行药物筛选，可以高效的富集目的基因长片段精确删除的阳性细胞克隆。
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