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公开(公告)号：CN117305254A
公开(公告)日：2023-12-29
申请号：CN202311499401.1
申请日：2023-11-13
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及猪δ冠状病毒，特别是指一种猪δ冠状病毒突变体病毒rPDCoV及其拯救方法和应用。本发明利用基因工程方法，对PDCoV野生毒株基因组进行改造，改造的氨基酸位点为病毒S蛋白S173→P和Y179→C，将改造后的病毒基因组克隆到pGF载体上，通过单酶切，体外转录以及电转染LLC‑PK1细胞，成功拯救出猪δ冠状病毒突变体病毒rPDCoV。本发明将PDCoV HNZK‑02株生物基因组分为6个片段，基于酵母转化相关同源重组的方法一步得到感染性克隆，避免了传统反向遗传学技术中需要将病毒基因组各片段逐一连接，也避免了传统的连接方法中酶切连接效率低下的问题，大大提高了连接效率。
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公开(公告)号：CN111955419B
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202010894845.5
申请日：2020-08-31
Applicant: 河南农业大学
IPC: A01K67/02
Abstract: 本发明属于家畜流行病领域，涉及猪流行性腹泻病毒（PEDV）与猪δ冠状病毒（PDCoV），特别是指PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型及其建立方法和应用。建立方法步骤如下：PDCoV和PEDV毒株的选择；选用5日龄健康仔猪，通过口服途径接种PDCoV毒株和PEDV毒株细胞的混合液；攻毒后每天测量体重、观察临床症状、并通过荧光定量PCR方法分别检测粪便排毒情况和小肠组织中的病毒载量并进行综合评价，建立PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型。本申请成功建立了PDCoV和PEDV共感染仔猪模型，为后续PDCoV与PEDV协同致病机理研究奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105420412B
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201511016093.8
申请日：2015-12-31
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种病毒的检测方法，具体涉及一种猪德尔塔冠状病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT‑PCR检测引物及检测方法。利用所述引物检测猪德尔塔冠状病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT‑PCR的方法，该方法不用于疾病的诊断和治疗，包括提取病毒的DNA后，按多重荧光定量RT‑PCR反应体系和反应条件对病毒进行检测,应用该方法和单重PCR对57份临床样品的多重PCR检测结果显示，同时感染这2种病毒的阳性率8.77％，感染PDCoV阳性率为19.30％，感染PEDV阳性率为26.32％。结果表明，建立多重PCR方法能够对PDCoV和PEDV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。
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公开(公告)号：CN105483291A
公开(公告)日：2016-04-13
申请号：CN201511021732.X
申请日：2015-12-31
Applicant: 河南农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2600/16 , C12Q2537/143 , C12Q2521/107
Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR检测引物。本发明多重RT-PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT-PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。
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公开(公告)号：CN105420412A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201511016093.8
申请日：2015-12-31
Applicant: 河南农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2600/16 , C12Q2537/143
Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测引物：猪德尔塔冠状病毒的引物序列如下：上游引物P1：5＇-GCGTTTCCTGGGCTGATT-3＇下游引物P2：5＇-ATGGCTACTGGCTGCGTTAC-3＇扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段383bp。本发明多重RT-PCR对PDCoV和PEDV的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL和4.52×103拷贝/μL，而对猪传染性胃肠炎病毒，博卡病毒，猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪轮状病毒的扩增结果均为阴性。应用该方法和单重PCR对57份临床样品的多重PCR检测结果显示，同时感染这2种病毒的阳性率为8.77%，感染PDCoV阳性率为19.30%，感染PEDV阳性率为26.32%。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104946777A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510406020.3
申请日：2015-07-10
Applicant: 河南农业大学
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q1/6851 , C12Q1/6883 , C12Q2600/158 , C12Q2561/101 , C12Q2545/114 , C12Q2531/113 , C12Q2545/101
Abstract: 本发明公开了一种检测TLR2/4介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物，序列如下：用于对TLR9进行定量PCR的特异性引物，序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示，该序列与猪TLR9 mRNA的一段互补。本发明有效的缩短实验时间、减少经费的使用等。通过优化的实验反应体系和反应条件，组成检测灵敏、方便的试剂盒，为TLR9介导的MyD88依赖型NF-κB信号通路中关键分子提供可靠的检测技术。
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公开(公告)号：CN103045543A
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201210522326.1
申请日：2012-12-07
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪传染性胃肠炎病毒毒株，其特征在于：猪传染性胃肠炎病毒（swine transmissible gastroenteritis virus），CCTCC NO：V201216。本发明的猪传染性胃肠炎病毒灭活后免疫猪只，可以给猪提供有效的保护，是一株比较理想的制苗候选毒株。
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公开(公告)号：CN102071256B
公开(公告)日：2012-08-29
申请号：CN200910172716.9
申请日：2009-11-25
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，设计与合成出引物，利用引物检测猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型的二重SYBRGreen I实时荧光PCR检测方法，包括提取样品的DNA后，利用SYBR Green I实时荧光PCR反应体系和SYBR Green I实时荧光PCR扩增程序对样品进行检测。本发明能够同时检测出猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型两种DNA病毒，不能检测出猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪流感病毒。本发明具有较好的敏感性、重复性与稳定性，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒病的鉴别与诊断。
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公开(公告)号：CN101880727B
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201010239995.9
申请日：2010-07-29
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明的技术方案公开了一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物，它包括肠球菌属引物的序列、聚集物质引物的序列和溶血素引物的序。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌属及其主要毒力基因的多重PCR方法。本方法特异性高；敏感性实验表明该方法最低能检测到100pg DNA。为肠球菌感染的分子流行病学调查，研究肠球菌致病机制机制、早期预防提供了一种新的快速检测方法，同时构建的标准质粒也为未来建立实时荧光定量PCR方法提供了基础。
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公开(公告)号：CN102125267A
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN201010030205.6
申请日：2010-01-19
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种荆芥牛肉干的生产方法，它包括如下步骤：将牛肉放入清水中浸泡，去除血水后切成牛肉丁；按牛肉重量的6～40％称取荆芥，清洗后切碎，将碎荆芥与牛肉丁拌匀后，滚揉，腌制；将牛肉丁进行初煮；取原汤，加入调味料，然后煮制原汤沸腾后，加入牛肉丁，小火煮制，加入料酒，味精，出锅，沥干牛肉丁；将牛肉丁置于电热恒温鼓风干燥箱中，烘烤2.5～4小时，制成荆芥牛肉干。本发明生产的荆芥风味牛肉干的研制是在传统工艺的基础上，结合现代加工手段，将营养丰富的牛肉与具有药食兼用的荆芥结合起来进行生产出既营养又保健的食品，既能满足消费者的需求又可作为药膳两用食品，有较好的社会价值和经济价值。
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