公开(公告)号：CN101880727A

公开(公告)日：2010-11-10

申请号：CN201010239995.9

申请日：2010-07-29

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王亚宾 ,  胡慧 ,  孟振北 ,  段志刚 ,  陈丽颖 ,  胡清林 ,  耿鑫

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明的技术方案公开了一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物，它包括肠球菌属引物的序列、聚集物质引物的序列和溶血素引物的序。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌属及其主要毒力基因的多重PCR方法。本方法特异性高；敏感性实验表明该方法最低能检测到100pg DNA。为肠球菌感染的分子流行病学调查，研究肠球菌致病机制机制、早期预防提供了一种新的快速检测方法，同时构建的标准质粒也为未来建立实时荧光定量PCR方法提供了基础。

公开(公告)号：CN101880727B

公开(公告)日：2012-03-21

申请号：CN201010239995.9

申请日：2010-07-29

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王亚宾 ,  胡慧 ,  孟振北 ,  段志刚 ,  陈丽颖 ,  胡清林 ,  耿鑫

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明的技术方案公开了一种肠球菌属及毒力基因多重PCR检测引物，它包括肠球菌属引物的序列、聚集物质引物的序列和溶血素引物的序。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌属及其主要毒力基因的多重PCR方法。本方法特异性高；敏感性实验表明该方法最低能检测到100pg DNA。为肠球菌感染的分子流行病学调查，研究肠球菌致病机制机制、早期预防提供了一种新的快速检测方法，同时构建的标准质粒也为未来建立实时荧光定量PCR方法提供了基础。

公开(公告)号：CN101880728A

公开(公告)日：2010-11-10

申请号：CN201010240001.5

申请日：2010-07-29

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王亚宾 ,  胡慧 ,  孟振北 ,  段志刚 ,  陈丽颖 ,  胡清林 ,  耿鑫

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种肠球菌属多重PCR检测引物，包括肠球菌属引物的序列、粪肠球菌种引物的序列和屎肠球菌种引物的序列。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌的多重PCR方法，大大简化了查验程序，可以在很多基层实验室使用。能一次PCR鉴定到肠球菌属及粪肠球菌或屎肠球菌种，能最少检测出1ng的基因组DNA，敏感性高，特异性比较强，有利于肠球菌的鉴别与诊断，并且具有的较好敏感性、重复性和稳定性，为临床中肠球菌的检测提供了一种新的快速检测方法，也为肠球菌感染的分子流行病学调查，研究肠球菌分子发病机制，早期诊断，诊断试剂盒的研制与开发，药物或疫苗的免疫机制提供了试验依据和技术手段。

公开(公告)号：CN101880728B

公开(公告)日：2012-03-21

申请号：CN201010240001.5

申请日：2010-07-29

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王亚宾 ,  胡慧 ,  孟振北 ,  段志刚 ,  陈丽颖 ,  胡清林 ,  耿鑫

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种肠球菌属多重PCR检测引物，包括肠球菌属引物的序列、粪肠球菌种引物的序列和屎肠球菌种引物的序列。本发明建立了一种快速准确鉴定肠球菌的多重PCR方法，大大简化了查验程序，可以在很多基层实验室使用。能一次PCR鉴定到肠球菌属及粪肠球菌或屎肠球菌种，能最少检测出1ng的基因组DNA，敏感性高，特异性比较强，有利于肠球菌的鉴别与诊断，并且具有的较好敏感性、重复性和稳定性，为临床中肠球菌的检测提供了一种新的快速检测方法，也为肠球菌感染的分子流行病学调查，研究肠球菌分子发病机制，早期诊断，诊断试剂盒的研制与开发，药物或疫苗的免疫机制提供了试验依据和技术手段。

公开(公告)号：CN102373297A

公开(公告)日：2012-03-14

申请号：CN201110221715.6

申请日：2011-08-04

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 魏战勇 ,  王亚宾 ,  孟振北 ,  刘芳 ,  韩志涛 ,  崔保安

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种CSFV、PRRSV与PCV2多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR引物及其检测方法，CSFV引物的序列如下：上游引物P1：5′-AAACGGAGGGACTAGCCGT-3′；下游引物P2：5′-TGCCATGTACAGCAGAGA-3′；PRRSV引物的序列如下：上游引物P3：5′-AAACCAGTCCAGAGGCAAG-3′；下游引物P4：5′-CCACAGTGTAACTTATCCTC-3′；PCV2引物的序列如下：上游引物P5：5′-GGGCCAGAATTCAACCTTACCC-3′；下游引物P6：5′-CGCACCTTCGGATATACTGTCA-3′；本发明分别设计扩增CSFV、PRRSV和PCV2的特异性引物，通过三重SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法能够同时检测CSFV、PRRSV和PCV2。CSFV、PRRSV和PCV2同时检出的极限拷贝数分别为177拷贝/μL，202拷贝/μL，181拷贝/μL。本发明的特异性试验结果良好，只出现三个特异性的峰值，重复性试验具有很好的稳定性并且本试验的最大优势在于能够同时检测CSFV、PRRSV和PCV2三种DNA病毒，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒的鉴别。