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公开(公告)号：CN1807617A
公开(公告)日：2006-07-26
申请号：CN200510112285.9
申请日：2005-12-29
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域，具体为一种Rep基因表达质粒，P5NIE顺式元件定点整合体系及其制备方法和在基因治疗中的应用。该定点整合体系由携带有P5NIE顺式元件及EGFP报告基因的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成。该定点整合体系可用于人类细胞株定点导入外源基因，制备程序简单，P5NIE顺式元件与其它报告基因联合适用可以达到使外源基因定点整合、长期表达的目的，便于得到稳定整合的携带转基因的细胞株。与其他治疗基因联合运用，可以适用于多种疾病的基因治疗。
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公开(公告)号：CN103409464A
公开(公告)日：2013-11-27
申请号：CN201310338102.X
申请日：2013-08-06
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种质粒pCMV-RBE-TK1-N2-EF1α-hFIXml及其构建方法和应用。该质粒含CMV启动子-RBE元件-TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子IX的稳定细胞。使用该表达质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响，提高表达效率；另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101157934B
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN200710046172.2
申请日：2007-09-20
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒(pBCFX+和pBCFX-)及其应用。该质粒使用含有Phi BT1整合酶及PhiC整合酶对应attP位点串连序列的中间插入LacZ表达框架作为质粒载体(pBCFX+和pBCFX-)置换克隆位点，采用插入失活作蓝白筛选。基于该质粒的克隆方法主要包括使用Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶混合物作为定点整合催化酶，插入DNA片段依据目的要求可以通过PCR等技术在两侧附加对应的attB序列，从而决定插入片段方向性。该克隆系可以方便操作含有特别内切酶位点的插入DNA，在大片段基因操作方面有独到优因为该体系不需要限制性酶，磷酸酶和连接酶操作，可以简化重组DNA操作方法。基因工程中有广泛应用前景。
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公开(公告)号：CN102051379A
公开(公告)日：2011-05-11
申请号：CN200910198576.2
申请日：2009-11-10
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/869 , C12N7/00 , C12N7/01
Abstract: 本发明属于医药生物技术领域，提供了一种重组单纯疱疹病毒遗传操作系统。该重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，包括HSV骨架载体和穿梭质粒；所述的HSV骨架载体包含HSV基因组DNA、BAC质粒骨架、多克隆位点、真核抗性基因以及原核抗性基因，在多克隆位点和真核抗性基因的外侧融入位点特异性重组酶系统识别序列；所述的穿梭质粒是包含多克隆位点的细菌克隆载体，并且在多克隆位点外侧融入位点特异性重组酶系统识别序列。该系统有效提高了单纯疱疹病毒遗传操作的便利性和可操作性，可广泛应用于复制缺陷型重组单纯疱疹病毒和选择复制型溶瘤单纯疱疹病毒的建立。
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公开(公告)号：CN101157934A
公开(公告)日：2008-04-09
申请号：CN200710046172.2
申请日：2007-09-20
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒(pBCFX+和pBCFX－)及其应用。该质粒使用含有Phi BT1整合酶及PhiC31整合酶对应attP位点串连序列的中间插入LacZ表达框架作为质粒载体(pBCFX+和pBCFX－)置换克隆位点，采用插入失活作蓝白筛选。基于该质粒的克隆方法主要包括使用PhiBT1整合酶及Phi C31整合酶混合物作为定点整合催化酶，插入DNA片段依据目的要求可以通过PCR等技术在两侧附加对应的attB序列，从而决定插入片段方向性。该克隆体系可以方便操作含有特别内切酶位点的插入DNA，在大片段基因操作方面有独到优势，因为该体系不需要限制性酶，磷酸酶和连接酶操作，可以简化重组DNA操作方法。在基因工程中有广泛应用前景。
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公开(公告)号：CN1827648A
公开(公告)日：2006-09-06
申请号：CN200510112199.8
申请日：2005-12-29
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域，具体为一种ΦC31整合酶的多克隆抗体及其制备方法和应用。首先表达和纯化ΦC31蛋白，然后由纯化的ΦC31蛋白直接与佐剂相混合，注射免疫动物，如家兔、小鼠、大鼠等，即制得ΦC31多克隆抗体。该多克隆抗体可用于特异性的识别人类293细胞经质粒转染表达的ΦC31整合酶的蛋白，也可用于检测标本中的ΦC31蛋白的分布，或用于封闭ΦC31整合酶的体外活性。
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公开(公告)号：CN1807647A
公开(公告)日：2006-07-26
申请号：CN200510112284.4
申请日：2005-12-29
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域，具体为一种rep基因表达质粒，RBE顺式元件定点整合体系及其制备方法和在基因治疗中的应用。该定点整合体系为由携带有RBE顺式元件及EGFP报告基因的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成，或者由携带有RBE顺式元件及人凝血因子IX的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成。该定点整合系统可用于在人类细胞株中导入外源基因，制备程序简单，与其他治疗基因联合运用，可以适用于多种疾病的基因治疗。
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