公开(公告)号：CN102703474A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210170810.2

申请日：2012-05-29

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈金中 ,  沈琦

IPC: C12N15/40 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种全合成经密码子优化的新布尼亚病毒NP蛋白编码序列及其应用。新布尼亚病毒NP蛋白编码序列如SEQIDNo.1所示。将编码序列SEQIDNo.1克隆到pQE30表达质粒，使用EColi.M15表达重组蛋白，以Hitrap纯化重组新布尼亚病毒NP蛋白。本发明的优点在于通过对NP蛋白编码按EColi.密码子偏好重新设计，人工合成，提高了EColi.表达新布尼亚病毒NP蛋白的效率，降低了制备重组新布尼亚病毒NP蛋白的成本，提高了产品的纯度。

公开(公告)号：CN103409464B

公开(公告)日：2018-08-24

申请号：CN201310338102.X

申请日：2013-08-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈金中 ,  阮婕 ,  沈琦 ,  薛京伦

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种质粒pCMV‑RBE‑TK1‑N2‑EF1α‑hFIXml及其构建方法和应用。该质粒含CMV启动子‑RBE元件‑TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子IX的稳定细胞。使用该表达质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响，提高表达效率；另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。

公开(公告)号：CN113832146A

公开(公告)日：2021-12-24

申请号：CN202111347672.6

申请日：2021-11-15

Applicant: 复旦大学附属中山医院

Inventor： 江峥增 ,  缪青 ,  岳蕾 ,  张苗苗 ,  纪元 ,  程韵枫 ,  尚果果 ,  王玲燕 ,  沈琦 ,  宿杰阿克苏 ,  张小垒 ,  徐磊 ,  沈立承 ,  洪杨 ,  彭睿

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明提供了一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法，该方法包括如下步骤：向装有福尔马林固定石蜡包埋样本的离心管中加入二甲苯，离心；弃去离心管中的二甲苯，加入无水乙醇进行离心；弃去离心管中的无水乙醇，孵育直至无水乙醇全部蒸发；向离心管中加入超纯水，并吹打混匀至匀质；将匀质液澄清，再涡旋，加入洗脱缓冲液离心，纯化得到病原微生物核酸；本发明的病原微生物核酸宏基因的结果显示都在10％以下，经过宏基因高通量检测证实确实有效的方法，且去人源性的核酸能力极强，故本发明的福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法可以最大程度地去除人源背景，做到仅抽提病原微生物核酸的目的。

公开(公告)号：CN103409464A

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201310338102.X

申请日：2013-08-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈金中 ,  阮婕 ,  沈琦 ,  薛京伦

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种质粒pCMV-RBE-TK1-N2-EF1α-hFIXml及其构建方法和应用。该质粒含CMV启动子-RBE元件-TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子IX的稳定细胞。使用该表达质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响，提高表达效率；另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。