公开(公告)号：CN103409464A

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201310338102.X

申请日：2013-08-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈金中 ,  阮婕 ,  沈琦 ,  薛京伦

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种质粒pCMV-RBE-TK1-N2-EF1α-hFIXml及其构建方法和应用。该质粒含CMV启动子-RBE元件-TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子IX的稳定细胞。使用该表达质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响，提高表达效率；另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。

公开(公告)号：CN103409464B

公开(公告)日：2018-08-24

申请号：CN201310338102.X

申请日：2013-08-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陈金中 ,  阮婕 ,  沈琦 ,  薛京伦

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种质粒pCMV‑RBE‑TK1‑N2‑EF1α‑hFIXml及其构建方法和应用。该质粒含CMV启动子‑RBE元件‑TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子IX的稳定细胞。使用该表达质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响，提高表达效率；另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。