用于检测整合酶ΦC31功能的真核细胞系统及其制备方法

    公开(公告)号:CN1827781A

    公开(公告)日:2006-09-06

    申请号:CN200510112200.7

    申请日:2005-12-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域,具体涉及一种用于检测整合酶ΦC31功能的真核细胞系统及其制备方法。该检测系统由重组报告PB[EGFP]转染人胚胎肾细胞系293后用G418筛选,挑选出单克隆细胞而获得,其中,PB[EGFP]是利用pEGFP-N2载体,在增强型烟草花叶病毒启动子(CMVIE)之后,顺序插入特异序列attP和attB,然后在其间加上一段牛生长因子的多聚腺苷酸而构成。该细胞系统可以评估出转染、转导、转化等多种途径表达的ΦC31整合酶,及其突变体等的活性和功能。该检测系统操作简便,准确性高,重复性好,是整合酶ΦC31在哺乳动物细胞中应用的重要定量评估系统。

    rep基因表达质粒,P5NIE顺式元件定点整合体系及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN1807617A

    公开(公告)日:2006-07-26

    申请号:CN200510112285.9

    申请日:2005-12-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域,具体为一种Rep基因表达质粒,P5NIE顺式元件定点整合体系及其制备方法和在基因治疗中的应用。该定点整合体系由携带有P5NIE顺式元件及EGFP报告基因的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成。该定点整合体系可用于人类细胞株定点导入外源基因,制备程序简单,P5NIE顺式元件与其它报告基因联合适用可以达到使外源基因定点整合、长期表达的目的,便于得到稳定整合的携带转基因的细胞株。与其他治疗基因联合运用,可以适用于多种疾病的基因治疗。

    ΦC31整合酶多克隆抗体及其应用

    公开(公告)号:CN1827648A

    公开(公告)日:2006-09-06

    申请号:CN200510112199.8

    申请日:2005-12-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域,具体为一种ΦC31整合酶的多克隆抗体及其制备方法和应用。首先表达和纯化ΦC31蛋白,然后由纯化的ΦC31蛋白直接与佐剂相混合,注射免疫动物,如家兔、小鼠、大鼠等,即制得ΦC31多克隆抗体。该多克隆抗体可用于特异性的识别人类293细胞经质粒转染表达的ΦC31整合酶的蛋白,也可用于检测标本中的ΦC31蛋白的分布,或用于封闭ΦC31整合酶的体外活性。

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