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公开(公告)号：CN114236113A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111575563.X
申请日：2021-12-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/53
Abstract: 本发明涉及一种2，4‑滴的即用型免疫传感器，在获得2，4‑滴模拟表位多肽后，将多肽与纳米荧光素酶分裂后的大片段融合表达，将纳米荧光素酶分裂后的小片段与2，4‑滴纳米抗体融合表达，通过优化融合蛋白中的连接臂长度及多肽拷贝数，选择具有较好信噪比和响应值组合用于2，4‑滴的检测，融合蛋白中的多肽和纳米抗体的结合，使得LgN和SmN重建形成具有催化发光活性的纳米荧光素酶，从而显著增强体系的发光强度，而2，4‑滴会将多肽与纳米抗体的结合解离，使得体系的发光强度降低，本发明实现了对小分子的免标记、免固定、免洗涤的检测，具有快速、简便、经济、实用性强、灵敏度高的优势。
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公开(公告)号：CN113831253A
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN202111298004.9
申请日：2021-11-04
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07C229/42 , C07C227/08 , C07C51/353 , C07C57/60 , C07C51/36 , C07C57/58 , C07C201/08 , C07C205/56 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了二甲戊灵半抗原及其制备方法和应用。二甲戊灵半抗原采用从头合成法，五种半抗原分别从二甲戊灵的苯甲基、苯氨基、戊烷基末端引入带有羧基的连接臂。通过试验比较，在二甲戊灵母体苯环三号位甲基上引入连接臂的半抗原效果最好。利用该半抗原制备的单克隆抗体灵敏度高，特异性强。用间接竞争酶联免疫测定(ic‑ELISA)的方法测得其灵敏度(IC50)为0.53μg/L，检测范围(IC10‑IC90)为0.11‑2.59μg/L。该单克隆抗体与其他二硝基苯类除草剂均无交叉反应(CR＜1.1％)。此外，利用该单克隆抗体制备了检测灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低的二甲戊灵胶体金快速检测试纸条。该试纸条可用于检测农产品中二甲戊灵的残留，其检测限达25μg/L。
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公开(公告)号：CN113698394A
公开(公告)日：2021-11-26
申请号：CN202111125286.2
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D405/06 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种丙环唑半抗原及其制备方法和应用。丙环唑半抗原采用从头合成法，在丙环唑的苯环上连接含有4个C原子的连接臂，并在连接臂末端引入可以和载体蛋白偶联的羧基基团。利用该半抗原制备的单克隆抗体灵敏度高，特异性强。用间接竞争酶联免疫测定(ic‑ELISA)的方法测得其灵敏度(IC50)为2.33μg/L，检测范围(IC10‑IC90)为0.26‑21.28μg/L。该单克隆抗体与丙环唑类似物均无交叉反应(CR＜0.1％)。此外，利用该单克隆抗体制备了检测灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低的丙环唑胶体金快速检测试纸条。该试纸条可用于检测农产品中丙环唑的残留，其检测限达5μg/L。
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公开(公告)号：CN105153280A
公开(公告)日：2015-12-16
申请号：CN201510418524.7
申请日：2015-07-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与苯噻菌酯免疫复合体特异性结合的多肽，包括所述多肽在检测苯噻菌酯中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用苯噻菌酯免疫复合体对噬菌体展示随机环八肽库进行3轮淘选，淘选出与苯噻菌酯免疫复合体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过非竞争噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在苯噻菌酯检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的非竞争噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中苯噻菌酯残留。
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公开(公告)号：CN118515730A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410607423.3
申请日：2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种与虫酰肼免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在虫酰肼免疫检测中的应用。本发明利用虫酰肼单克隆抗体与虫酰肼形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和一代测序，获得了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为0.10ng/mL，线性范围为0.035‑0.325ng/mL。所建立的非竞争ELISA的灵敏度低于已报道的虫酰肼免疫检测方法。同时基于抗免疫复合物多肽所建立的非竞ELISA在检测实际样品中的虫酰肼残留的平均回收率在82.6％～99.5％之间。综上所述，本发明提供的抗虫酰肼抗体免疫复合物多肽具有制备简单，灵敏度高，实用性好的特点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118388595A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410607463.8
申请日：2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种与丙环唑免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在丙环唑免疫检测中的应用。本发明利用丙环唑单克隆抗体与丙环唑形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和一代测序，获得了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为0.06ng/mL，高于目前所报道的丙环唑免疫检测方法。可用于快速、灵敏、低成本、高特异性地检测环境和农产品中丙环唑残留。
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公开(公告)号：CN117384254A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311372853.3
申请日：2023-10-23
IPC: C07K7/06 , C07K16/44 , C12N15/11 , G01N33/53 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种与二甲戊灵抗体免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在二甲戊灵免疫检测中的应用。本发明利用二甲戊灵单克隆抗体与二甲戊灵形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和一代测序，获得了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为0.15ng/mL，高于目前所报道的二甲戊灵免疫检测方法。本发明还涉及该多肽在二甲戊灵免疫层析试纸条上的应用。通过化学合成得到的无噬菌体抗免疫复合物多肽建立的非竞争免疫层析试纸条对二甲戊灵的可视检测限为2.5ng/mL，可用于快速、灵敏、低成本、高特异性地检测环境和农产品中二甲戊灵残留。
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公开(公告)号：CN110938116B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN201910534366.X
申请日：2019-06-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/00 , G01N33/533 , G01N33/558 , G01N33/58 , G01N33/68
Abstract: 本发明涉及一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽及其应用，尤其是一种与苯噻菌酯单克隆抗体特异性结合的多价模拟表位多肽，以及所述多价多肽在免疫检测中的应用，属于生物技术领域。基于苯噻菌酯噬菌体展示多肽模拟表位的氨基酸序列，以赖氨酸为支架和间隔臂，固相合成获得多价模拟表位多肽；将多价多肽的氮端乙酰化，碳端的赖氨酸侧链提供唯一的游离氨基用于标记。这种多价模拟表位多肽与苯噻菌酯单克隆抗体的亲和力是单价模拟表位多肽的13.6倍，在均相免疫分析方法中可以显著降低检测方法的背景信号，提高检测分析方法的敏感性。该多价模拟表位多肽可作为化学合成半抗原的替代物，建立均相、一步的免疫检测方法，用于快速、灵敏、方便和经济的检测环境和农产品中残留的苯噻菌酯。
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公开(公告)号：CN110567929B
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN201910965914.4
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/64 , G01N33/558 , G01N33/68 , G01N33/533
Abstract: 本发明涉及一种氯噻啉的双信号侧流免疫层析检测方法，首先重组示踪物与分析物共同竞争偶联在胶体金上的分析物抗体的结合位点，随后重组示踪物被抗His‑tag抗体捕获，对于色度信号，可直接再自然光源下用相机拍照，对于荧光信号，将试纸条放置于多功能成像仪中拍照，随后对图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与增强型绿色荧光蛋白的重组蛋白为荧光供体，以抗氯噻啉抗体偶联的胶体金颗粒为荧光受体，根据荧光内滤效应，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以对小分子的定量、在线检测。
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公开(公告)号：CN113999866A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111298003.4
申请日：2021-11-04
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种高密度展示的噬菌粒载体，包括所述载体在随机多肽文库构建中的应用。本发明通过分子克隆技术，基于pIII展示的噬菌粒pComb3xss，构建了可用于高密度展示外源蛋白的噬菌粒载体pComb‑pVIII。该载体将外源蛋白展示于丝状噬菌体pVIII蛋白N端，通过柔性连接臂GGGSS将二者连接，由乳糖启动子和操纵子调控下游外源蛋白基因的表达。该载体引入了无法切割随机多肽编码序列的限制性核酸酶切位点，避免了随机多肽库多样性的丢失。本发明还涉及该噬菌粒载体在随机多肽文库构建中的应用。基于该噬菌粒构建的噬菌体展示随机多肽库，具有空载率低、库容量大、展示密度高等优点，在具有生物功能的多肽的筛选方面具有良好的应用价值。
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