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公开(公告)号：CN113831253B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202111298004.9
申请日：2021-11-04
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07C229/42 , C07C227/08 , C07C51/353 , C07C57/60 , C07C51/36 , C07C57/58 , C07C201/08 , C07C205/56 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了二甲戊灵半抗原及其制备方法和应用。二甲戊灵半抗原采用从头合成法，五种半抗原分别从二甲戊灵的苯甲基、苯氨基、戊烷基末端引入带有羧基的连接臂。通过试验比较，在二甲戊灵母体苯环三号位甲基上引入连接臂的半抗原效果最好。利用该半抗原制备的单克隆抗体灵敏度高，特异性强。用间接竞争酶联免疫测定(ic‑ELISA)的方法测得其灵敏度(IC50)为0.53μg/L，检测范围(IC10‑IC90)为0.11‑2.59μg/L。该单克隆抗体与其他二硝基苯类除草剂均无交叉反应(CR＜1.1％)。此外，利用该单克隆抗体制备了检测灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低的二甲戊灵胶体金快速检测试纸条。该试纸条可用于检测农产品中二甲戊灵的残留，其检测限达25μg/L。
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公开(公告)号：CN112924669B
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202110170874.1
申请日：2021-02-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/558 , G01N21/78
Abstract: 本发明公开一种基于光学三原色的多色测流免疫层析试纸条及制备方法，通过将竞争免疫分析和非竞争免疫分析分别标记不同示踪物，并集成在一张试纸条上，基于相加和相减三原色的原理实现随着分析物浓度的变化，在检测线（T线）上呈现出不同颜色，提高半定量分析的准确性和直观性，试纸条的控制线（C线）会随着T线结合标记物量的不同也呈现出不同颜色，可用于校正检测结果，在定量分析中，多色信号可互为内在参比，提高了多色试纸条定量检测的准确性。
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公开(公告)号：CN110567929A
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201910965914.4
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/64 , G01N33/558 , G01N33/68 , G01N33/533
Abstract: 本发明涉及一种氯噻啉的双信号侧流免疫层析检测方法，首先重组示踪物与分析物共同竞争偶联在胶体金上的分析物抗体的结合位点，随后重组示踪物被抗His-tag抗体捕获，对于色度信号，可直接再自然光源下用相机拍照，对于荧光信号，将试纸条放置于多功能成像仪中拍照，随后对图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与增强型绿色荧光蛋白的重组蛋白为荧光供体，以抗氯噻啉抗体偶联的胶体金颗粒为荧光受体，根据荧光内滤效应，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以对小分子的定量、在线检测。
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公开(公告)号：CN110938116B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN201910534366.X
申请日：2019-06-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/00 , G01N33/533 , G01N33/558 , G01N33/58 , G01N33/68
Abstract: 本发明涉及一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽及其应用，尤其是一种与苯噻菌酯单克隆抗体特异性结合的多价模拟表位多肽，以及所述多价多肽在免疫检测中的应用，属于生物技术领域。基于苯噻菌酯噬菌体展示多肽模拟表位的氨基酸序列，以赖氨酸为支架和间隔臂，固相合成获得多价模拟表位多肽；将多价多肽的氮端乙酰化，碳端的赖氨酸侧链提供唯一的游离氨基用于标记。这种多价模拟表位多肽与苯噻菌酯单克隆抗体的亲和力是单价模拟表位多肽的13.6倍，在均相免疫分析方法中可以显著降低检测方法的背景信号，提高检测分析方法的敏感性。该多价模拟表位多肽可作为化学合成半抗原的替代物，建立均相、一步的免疫检测方法，用于快速、灵敏、方便和经济的检测环境和农产品中残留的苯噻菌酯。
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公开(公告)号：CN110567929B
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN201910965914.4
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/64 , G01N33/558 , G01N33/68 , G01N33/533
Abstract: 本发明涉及一种氯噻啉的双信号侧流免疫层析检测方法，首先重组示踪物与分析物共同竞争偶联在胶体金上的分析物抗体的结合位点，随后重组示踪物被抗His‑tag抗体捕获，对于色度信号，可直接再自然光源下用相机拍照，对于荧光信号，将试纸条放置于多功能成像仪中拍照，随后对图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与增强型绿色荧光蛋白的重组蛋白为荧光供体，以抗氯噻啉抗体偶联的胶体金颗粒为荧光受体，根据荧光内滤效应，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以对小分子的定量、在线检测。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112924669A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110170874.1
申请日：2021-02-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/558 , G01N21/78
Abstract: 本发明公开一种基于光学三原色的多色测流免疫层析试纸条及制备方法，通过将竞争免疫分析和非竞争免疫分析分别标记不同示踪物，并集成在一张试纸条上，基于相加和相减三原色的原理实现随着分析物浓度的变化，在检测线（T线）上呈现出不同颜色，提高半定量分析的准确性和直观性，试纸条的控制线（C线）会随着T线结合标记物量的不同也呈现出不同颜色，可用于校正检测结果，在定量分析中，多色信号可互为内在参比，提高了多色试纸条定量检测的准确性。
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公开(公告)号：CN110938116A
公开(公告)日：2020-03-31
申请号：CN201910534366.X
申请日：2019-06-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/00 , G01N33/533 , G01N33/558 , G01N33/58 , G01N33/68
Abstract: 本发明涉及一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽及其应用，尤其是一种与苯噻菌酯单克隆抗体特异性结合的多价模拟表位多肽，以及所述多价多肽在免疫检测中的应用，属于生物技术领域。基于苯噻菌酯噬菌体展示多肽模拟表位的氨基酸序列，以赖氨酸为支架和间隔臂，固相合成获得多价模拟表位多肽；将多价多肽的氮端乙酰化，碳端的赖氨酸侧链提供唯一的游离氨基用于标记。这种多价模拟表位多肽与苯噻菌酯单克隆抗体的亲和力是单价模拟表位多肽的13.6倍，在均相免疫分析方法中可以显著降低检测方法的背景信号，提高检测分析方法的敏感性。该多价模拟表位多肽可作为化学合成半抗原的替代物，建立均相、一步的免疫检测方法，用于快速、灵敏、方便和经济的检测环境和农产品中残留的苯噻菌酯。
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公开(公告)号：CN110256531A
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201910387139.9
申请日：2019-05-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与吡虫啉抗体特异性结合的多肽，以及该多肽在检测吡虫啉中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的吡虫啉抗体对噬菌体展示随机线十二肽库进行3轮淘选，淘选出与吡虫啉抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在吡虫啉检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中吡虫啉残留。
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公开(公告)号：CN113698394B
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202111125286.2
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D405/06 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种丙环唑半抗原及其制备方法和应用。丙环唑半抗原采用从头合成法，在丙环唑的苯环上连接含有4个C原子的连接臂，并在连接臂末端引入可以和载体蛋白偶联的羧基基团。利用该半抗原制备的单克隆抗体灵敏度高，特异性强。用间接竞争酶联免疫测定(ic‑ELISA)的方法测得其灵敏度(IC50)为2.33μg/L，检测范围(IC10‑IC90)为0.26‑21.28μg/L。该单克隆抗体与丙环唑类似物均无交叉反应(CR＜0.1％)。此外，利用该单克隆抗体制备了检测灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低的丙环唑胶体金快速检测试纸条。该试纸条可用于检测农产品中丙环唑的残留，其检测限达5μg/L。
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公开(公告)号：CN110627872A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910965913.X
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与吡虫啉抗体特异性结合的多肽，以及该多肽在检测吡虫啉中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的吡虫啉抗体对噬菌体展示随机线十二肽库进行3轮淘选，淘选出与吡虫啉抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在吡虫啉检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中吡虫啉残留。
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