公开(公告)号：CN113861270A

公开(公告)日：2021-12-31

申请号：CN202111125290.9

申请日：2021-09-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  王鸣华 ,  尤天阳 ,  丁园 ,  施海燕 ,  周亮亮

IPC: C07K7/06 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与噻虫胺抗体特异性结合的多肽，包括所述多肽在噻虫胺检测中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用噻虫胺抗体对噬菌体展示随机八肽、九肽库进行淘选，筛选与噻虫胺抗体特异性结合的噬菌体展示多肽；三轮淘选后，随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增，通过噬菌体ELISA方法验证阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序，获得多肽的氨基酸序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在噻虫胺检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的竞争噬菌体酶联免疫分析方法可用于灵敏、准确、便捷、低成本的检测环境和农产品中噻虫胺残留。

公开(公告)号：CN104987361B

公开(公告)日：2020-02-14

申请号：CN201510418522.8

申请日：2015-07-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王鸣华 ,  华修德 ,  冯璐 ,  施海燕

IPC: C07K7/06 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与苯噻菌酯抗体特异性结合的多肽，包括所述多肽在检测苯噻菌酯中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的苯噻菌酯抗体对噬菌体展示随机环八肽库进行3轮淘选，淘选出与苯噻菌酯抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在苯噻菌酯检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中苯噻菌酯残留。

公开(公告)号：CN110567929A

公开(公告)日：2019-12-13

申请号：CN201910965914.4

申请日：2019-10-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  王鸣华 ,  丁园 ,  陈贺 ,  孙娜娜

IPC: G01N21/64 ,  G01N33/558 ,  G01N33/68 ,  G01N33/533

Abstract: 本发明涉及一种氯噻啉的双信号侧流免疫层析检测方法，首先重组示踪物与分析物共同竞争偶联在胶体金上的分析物抗体的结合位点，随后重组示踪物被抗His-tag抗体捕获，对于色度信号，可直接再自然光源下用相机拍照，对于荧光信号，将试纸条放置于多功能成像仪中拍照，随后对图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与增强型绿色荧光蛋白的重组蛋白为荧光供体，以抗氯噻啉抗体偶联的胶体金颗粒为荧光受体，根据荧光内滤效应，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以对小分子的定量、在线检测。

公开(公告)号：CN104327186B

公开(公告)日：2017-02-01

申请号：CN201410359926.X

申请日：2014-07-25

Applicant: 无锡市白蚁防治中心 ,  南京农业大学

Inventor： 陆艺文 ,  王鸣华 ,  夏亚中 ,  华修德 ,  周秋君 ,  李伟

IPC: C07K16/44 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明涉及一种抗联苯菊酯单克隆抗体及其用途，尤其是一种可特异性识别联苯菊酯的单克隆抗体，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，以及所述单克隆抗体的用途，属于生物学领域。将其人工抗原免疫BALB/c雌性小鼠，将骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾脏细胞进行细胞融合，制备得到杂交瘤细胞；通过系列筛选和亚克隆得到能稳定分泌抗联苯菊酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；再将该杂交瘤细胞株注射小鼠腹内制得腹水；采用辛酸-硫酸铵法纯化小鼠腹水，得到所述的单克隆抗体。制得联苯菊酯的特异性单克隆抗体。这种抗体与其他化合物不发生交叉反应。用该抗体建立的酶联免疫层析分析方法可用于快速、灵敏、方便和廉价检测环境和农产品中联苯菊酯残留。

公开(公告)号：CN104987361A

公开(公告)日：2015-10-21

申请号：CN201510418522.8

申请日：2015-07-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王鸣华 ,  华修德 ,  冯璐 ,  施海燕

IPC: C07K7/06 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与苯噻菌酯抗体特异性结合的多肽，包括所述多肽在检测苯噻菌酯中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的苯噻菌酯抗体对噬菌体展示随机环八肽库进行3轮淘选，淘选出与苯噻菌酯抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在苯噻菌酯检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中苯噻菌酯残留。

公开(公告)号：CN103613563B

公开(公告)日：2015-05-13

申请号：CN201310667544.9

申请日：2013-12-11

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王鸣华 ,  袁玉龙 ,  华修德 ,  施海燕

IPC: C07D277/74 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明涉及苯噻菌酯抗原、抗体的制备及其应用，属于免疫化学分析技术领域。苯噻菌酯化学名称为2-[[(5-甲氧基-2-苯并噻唑)-硫甲基]-α-(E)-甲氧基亚甲基]苯乙酸甲酯。在碱性条件下，通过对苯噻菌酯结构中羧酸酯进行水解，合成了人工半抗原，其化学名称为2-[[(5-甲氧基-2-苯并噻唑)-硫甲基]-α-(E)-甲氧基亚甲基]苯乙酸，将其分别于牛血清蛋白和卵清蛋白偶联制备人工抗原。将人工抗原免疫BALB／c雌性小鼠，制得苯噻菌酯的特异性单克隆抗体。这种抗体与其他化合物不发生交叉反应。用该抗体建立的酶联免疫层析分析方法可用于快速、灵敏、方便和廉价检测环境和农产品中苯噻菌酯残留。

公开(公告)号：CN103102415B

公开(公告)日：2014-07-30

申请号：CN201210238321.6

申请日：2012-07-11

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘凤权 ,  王利民 ,  华修德 ,  李刚

IPC: C07K16/44 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及同时识别吡虫啉和甲基对硫磷农药的双特异性单克隆抗体及其制备方法，属于生物技术领域。用杂交-杂交瘤技术将分泌抗甲基对硫磷单克隆抗体的杂交瘤细胞和经吡虫啉抗原免疫的小鼠脾细胞进行融合，获得了能稳定分泌同时抗甲基对硫磷和吡虫啉农药的双特异性单克隆抗体FQ-D6。此抗体经过有效性验证证明可用于农业生产环境和农产品中甲基对硫磷和吡虫啉残留的快速灵敏检测。本发明涉及的同时抗甲基对硫磷及吡虫啉农药双特异性单克隆抗体制备技术简便可行，抗体的整个制备过程无需特别的仪器设备，容易工厂化规模生产。

公开(公告)号：CN120040544A

公开(公告)日：2025-05-27

申请号：CN202410750493.4

申请日：2024-06-12

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  尤天阳 ,  马瑾煜 ,  黄岳 ,  王鸣华

IPC: C07K7/06 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种与硫丹抗体免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在硫丹免疫检测中的应用。本发明利用硫丹单克隆抗体与硫丹形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和Sanger测序，获得阳性克隆及其多肽序列。基于最佳多肽所建立的非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为6.8 ng/mL，可用于灵敏、高特异性地检测环境和农产品中硫丹残留。

公开(公告)号：CN118812638A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202410609602.0

申请日：2024-05-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  黄联润 ,  丁园 ,  尤天阳 ,  崔盼盼

IPC: C07K7/06 ,  C07K16/44 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53 ,  G01N33/543 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种与氯氰菊酯免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在氯氰菊酯免疫检测中的应用。本发明利用氯氰菊酯单克隆抗体与氯氰菊酯形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出抗免疫复合物多肽。通过ELISA和一代测序，鉴定了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争ELISA的半饱和浓度为1.44ng/mL，优于目前所报道的氯氰菊酯免疫检测方法。本发明还涉及该多肽在氯氰菊酯免疫层析试纸条上的应用。通过固相化学合成得到的无噬菌体抗免疫复合物多肽和胶体金建立了非竞争免疫层析试纸条，其对氯氰菊酯的可视检测限为10ng/mL，优于已报道的氯氰菊酯免疫层析分析方法。同时，该试纸条检测农产品中的氯氰菊酯残留具有良好的准确性。

公开(公告)号：CN118459552A

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202410607446.4

申请日：2024-05-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  李姣 ,  尤天阳 ,  陆阳 ,  王鸣华

IPC: C07K7/08 ,  C07K16/44 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53 ,  G01N33/58 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种与高效氟吡甲禾灵免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在高效氟吡甲禾灵免疫检测中的应用。本发明利用高效氟吡甲禾灵单克隆抗体与高效氟吡甲禾灵形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和一代测序，获得了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为1.83ng/mL，高于目前所报道的高效氟吡甲禾灵免疫检测方法。可用于快速、灵敏、低成本、高特异性地检测环境和农产品中高效氟吡甲禾灵残留。