公开(公告)号：CN118388594A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410607380.9

申请日：2024-05-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  崔盼盼 ,  丁园 ,  马瑾煜 ,  尤天阳

IPC: C07K7/06 ,  C07K16/44 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种高灵敏度的溴氰菊酯抗免疫复合物多肽，以及所述多肽在溴氰菊酯残留检测的非竞争性侧流免疫层析方法中的应用。本发明通过混合淘选噬菌体展示环七、八、九和十肽库，成功获得了17种溴氰菊酯抗免疫复合物多肽，均特异性结合溴氰菊酯单克隆抗体与溴氰菊酯形成的免疫复合物。序列为CYFDGAWYAC的多肽在非竞争性噬菌体酶联免疫吸附分析方法中的半饱和浓度为1.49ng/mL，灵敏度比基于包被原的竞争性酶联免疫吸附分析方法提高了209倍，且高于目前所报道的其他溴氰菊酯免疫检测方法。此外，本发明还涉及将固相合成的多肽应用于非竞争性侧流免疫层析试纸条，实现溴氰菊酯残留的快速检测。通过生物素‑链霉亲和素系统，C端生物素修饰的抗免疫复合物多肽与胶体金标记的链霉亲和素结合，制备了胶体金标记抗免疫复合物多肽探针，山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体和兔抗链霉亲和素多克隆抗体分别作为检测(T)线和控制(C)线，实现了溴氰菊酯正读数试纸条的制备。该试纸条在最佳缓冲液中对溴氰菊酯的可视检测限为6.25ng/mL，在小麦、大白菜和芹菜中为0.5μg/mL，且检测时间仅需8min。因此，本发明为溴氰菊酯检测提供了一种高灵敏度的多肽试剂，并建立了非竞争免疫层析方法实现了农产品中溴氰菊酯残留的快速、灵敏、低成本地检测，可作为一种可靠的溴氰菊酯初筛和现场检测工具。

公开(公告)号：CN118388595A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410607463.8

申请日：2024-05-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  李姣 ,  丁园 ,  崔盼盼 ,  王鸣华

IPC: C07K7/06 ,  C07K16/44 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种与丙环唑免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在丙环唑免疫检测中的应用。本发明利用丙环唑单克隆抗体与丙环唑形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和一代测序，获得了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为0.06ng/mL，高于目前所报道的丙环唑免疫检测方法。可用于快速、灵敏、低成本、高特异性地检测环境和农产品中丙环唑残留。

公开(公告)号：CN118812638A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202410609602.0

申请日：2024-05-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 华修德 ,  黄联润 ,  丁园 ,  尤天阳 ,  崔盼盼

IPC: C07K7/06 ,  C07K16/44 ,  C12N15/11 ,  G01N33/53 ,  G01N33/543 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种与氯氰菊酯免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在氯氰菊酯免疫检测中的应用。本发明利用氯氰菊酯单克隆抗体与氯氰菊酯形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出抗免疫复合物多肽。通过ELISA和一代测序，鉴定了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争ELISA的半饱和浓度为1.44ng/mL，优于目前所报道的氯氰菊酯免疫检测方法。本发明还涉及该多肽在氯氰菊酯免疫层析试纸条上的应用。通过固相化学合成得到的无噬菌体抗免疫复合物多肽和胶体金建立了非竞争免疫层析试纸条，其对氯氰菊酯的可视检测限为10ng/mL，优于已报道的氯氰菊酯免疫层析分析方法。同时，该试纸条检测农产品中的氯氰菊酯残留具有良好的准确性。