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公开(公告)号：CN118812638A
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202410609602.0
申请日：2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/06 , C07K16/44 , C12N15/11 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种与氯氰菊酯免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在氯氰菊酯免疫检测中的应用。本发明利用氯氰菊酯单克隆抗体与氯氰菊酯形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出抗免疫复合物多肽。通过ELISA和一代测序，鉴定了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争ELISA的半饱和浓度为1.44ng/mL，优于目前所报道的氯氰菊酯免疫检测方法。本发明还涉及该多肽在氯氰菊酯免疫层析试纸条上的应用。通过固相化学合成得到的无噬菌体抗免疫复合物多肽和胶体金建立了非竞争免疫层析试纸条，其对氯氰菊酯的可视检测限为10ng/mL，优于已报道的氯氰菊酯免疫层析分析方法。同时，该试纸条检测农产品中的氯氰菊酯残留具有良好的准确性。
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公开(公告)号：CN113698394B
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202111125286.2
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D405/06 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种丙环唑半抗原及其制备方法和应用。丙环唑半抗原采用从头合成法，在丙环唑的苯环上连接含有4个C原子的连接臂，并在连接臂末端引入可以和载体蛋白偶联的羧基基团。利用该半抗原制备的单克隆抗体灵敏度高，特异性强。用间接竞争酶联免疫测定(ic‑ELISA)的方法测得其灵敏度(IC50)为2.33μg/L，检测范围(IC10‑IC90)为0.26‑21.28μg/L。该单克隆抗体与丙环唑类似物均无交叉反应(CR＜0.1％)。此外，利用该单克隆抗体制备了检测灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低的丙环唑胶体金快速检测试纸条。该试纸条可用于检测农产品中丙环唑的残留，其检测限达5μg/L。
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公开(公告)号：CN114236113B
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202111575563.X
申请日：2021-12-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/53
Abstract: 本发明涉及一种2，4‑滴的即用型免疫传感器，在获得2，4‑滴模拟表位多肽后，将多肽与纳米荧光素酶分裂后的大片段融合表达，将纳米荧光素酶分裂后的小片段与2，4‑滴纳米抗体融合表达，通过优化融合蛋白中的连接臂长度及多肽拷贝数，选择具有较好信噪比和响应值组合用于2，4‑滴的检测，融合蛋白中的多肽和纳米抗体的结合，使得LgN和SmN重建形成具有催化发光活性的纳米荧光素酶，从而显著增强体系的发光强度，而2，4‑滴会将多肽与纳米抗体的结合解离，使得体系的发光强度降低，本发明实现了对小分子的免标记、免固定、免洗涤的检测，具有快速、简便、经济、实用性强、灵敏度高的优势。
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公开(公告)号：CN110627872A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910965913.X
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与吡虫啉抗体特异性结合的多肽，以及该多肽在检测吡虫啉中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的吡虫啉抗体对噬菌体展示随机线十二肽库进行3轮淘选，淘选出与吡虫啉抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在吡虫啉检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中吡虫啉残留。
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公开(公告)号：CN113861270A
公开(公告)日：2021-12-31
申请号：CN202111125290.9
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/06 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/53
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与噻虫胺抗体特异性结合的多肽，包括所述多肽在噻虫胺检测中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用噻虫胺抗体对噬菌体展示随机八肽、九肽库进行淘选，筛选与噻虫胺抗体特异性结合的噬菌体展示多肽；三轮淘选后，随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增，通过噬菌体ELISA方法验证阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序，获得多肽的氨基酸序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在噻虫胺检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的竞争噬菌体酶联免疫分析方法可用于灵敏、准确、便捷、低成本的检测环境和农产品中噻虫胺残留。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110567929A
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201910965914.4
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/64 , G01N33/558 , G01N33/68 , G01N33/533
Abstract: 本发明涉及一种氯噻啉的双信号侧流免疫层析检测方法，首先重组示踪物与分析物共同竞争偶联在胶体金上的分析物抗体的结合位点，随后重组示踪物被抗His-tag抗体捕获，对于色度信号，可直接再自然光源下用相机拍照，对于荧光信号，将试纸条放置于多功能成像仪中拍照，随后对图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与增强型绿色荧光蛋白的重组蛋白为荧光供体，以抗氯噻啉抗体偶联的胶体金颗粒为荧光受体，根据荧光内滤效应，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以对小分子的定量、在线检测。
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公开(公告)号：CN118388594A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410607380.9
申请日：2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/06 , C07K16/44 , C12N15/11 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种高灵敏度的溴氰菊酯抗免疫复合物多肽，以及所述多肽在溴氰菊酯残留检测的非竞争性侧流免疫层析方法中的应用。本发明通过混合淘选噬菌体展示环七、八、九和十肽库，成功获得了17种溴氰菊酯抗免疫复合物多肽，均特异性结合溴氰菊酯单克隆抗体与溴氰菊酯形成的免疫复合物。序列为CYFDGAWYAC的多肽在非竞争性噬菌体酶联免疫吸附分析方法中的半饱和浓度为1.49ng/mL，灵敏度比基于包被原的竞争性酶联免疫吸附分析方法提高了209倍，且高于目前所报道的其他溴氰菊酯免疫检测方法。此外，本发明还涉及将固相合成的多肽应用于非竞争性侧流免疫层析试纸条，实现溴氰菊酯残留的快速检测。通过生物素‑链霉亲和素系统，C端生物素修饰的抗免疫复合物多肽与胶体金标记的链霉亲和素结合，制备了胶体金标记抗免疫复合物多肽探针，山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体和兔抗链霉亲和素多克隆抗体分别作为检测(T)线和控制(C)线，实现了溴氰菊酯正读数试纸条的制备。该试纸条在最佳缓冲液中对溴氰菊酯的可视检测限为6.25ng/mL，在小麦、大白菜和芹菜中为0.5μg/mL，且检测时间仅需8min。因此，本发明为溴氰菊酯检测提供了一种高灵敏度的多肽试剂，并建立了非竞争免疫层析方法实现了农产品中溴氰菊酯残留的快速、灵敏、低成本地检测，可作为一种可靠的溴氰菊酯初筛和现场检测工具。
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公开(公告)号：CN117903256A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202311255443.0
申请日：2023-09-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/64 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种能够与二甲戊灵单克隆抗体特异性结合的噬菌体展示多肽，以及所述多肽在二甲戊灵免疫检测中的应用。本发明从噬菌体随机展示多肽库中淘选出了两种能够与二甲戊灵单克隆抗体特异性结合的噬菌体多肽。利用所得到的多肽和二甲戊灵单克隆抗体可建立竞争型酶连免疫吸附分析方法，经过优化，方法的半抑制浓度可达3.77ng/mL。该多肽可以通过固相合成技术被制备为无噬菌体载体的多肽，能够与二甲戊灵单克隆抗体建立免疫层析分析方法。该免疫层析分析方法的灵敏度相较于使用化学半抗原所建立的免疫层析分析方法提高两倍，最低检测浓度为5ng/mL。本发明为二甲戊灵免疫检测技术的开发提供了一种高灵敏度，实用可靠的竞争试剂。
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公开(公告)号：CN114276292B
公开(公告)日：2023-07-11
申请号：CN202111647665.8
申请日：2021-12-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D215/50 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了二氯喹啉酸半抗原及其制备方法和应用。二氯喹啉酸半抗原采用从头化学合成，最大程度地保留了二氯喹啉酸的特征结构，且引入了合适的连接臂，尽可能地暴露出二氯喹啉酸的特征结构。将二氯喹啉酸半抗原与载体蛋白偶联，制备出了二氯喹啉酸人工抗原。利用该人工抗原获得了二氯喹啉酸单克隆抗体，该抗体灵敏度高，特异性强。经间接竞争酶联免疫吸附分析(ic‑ELISA)测定，二氯喹啉酸单克隆抗体的灵敏度(IC50)为1.63ng/mL，线性范围(IC10‑IC90)为0.28～10.38ng/mL，与二氯喹啉酸结构类似物农药均无交叉反应(CR＜0.1％)。基于二氯喹啉酸单克隆抗体制备的胶体金试纸条灵敏度高、特异性强，其检测限为8ng/mL，可用于农产品和环境样品中二氯喹啉酸残留的快速检测。
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公开(公告)号：CN114276292A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111647665.8
申请日：2021-12-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D215/50 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了二氯喹啉酸半抗原及其制备方法和应用。二氯喹啉酸半抗原采用从头化学合成，最大程度地保留了二氯喹啉酸的特征结构，且引入了合适的连接臂，尽可能地暴露出二氯喹啉酸的特征结构。将二氯喹啉酸半抗原与载体蛋白偶联，制备出了二氯喹啉酸人工抗原。利用该人工抗原获得了二氯喹啉酸单克隆抗体，该抗体灵敏度高，特异性强。经间接竞争酶联免疫吸附分析(ic‑ELISA)测定，二氯喹啉酸单克隆抗体的灵敏度(IC50)为1.63ng/mL，线性范围(IC10‑IC90)为0.28～10.38ng/mL，与二氯喹啉酸结构类似物农药均无交叉反应(CR＜0.1％)。基于二氯喹啉酸单克隆抗体制备的胶体金试纸条灵敏度高、特异性强，其检测限为8ng/mL，可用于农产品和环境样品中二氯喹啉酸残留的快速检测。
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