公开(公告)号：CN101974527B

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201010278620.3

申请日：2010-09-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 任竹青 ,  熊远著 ,  蒋思文 ,  邓昌彦

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于猪的动物生物技术与育种领域，具体涉及猪异柠檬酸脱氢酶基因IDH3β的启动子的克隆、活性分析和启动子区突变研究。本发明的步骤包括：从猪血液中提取基因组DNA，设计引物，采用TAIL-PCR技术经过两轮扩增获得猪IDH3β基因上游5’侧翼2447bp的基因组碱基序列，并进行序列比较分析和遗传变异检测；采用5’端缺失策略扩增IDH3β基因上游5’侧翼区，将获得的DNA序列构建荧光素酶报告基因载体，测定其启动子活性，鉴定IDH3β基因启动子。本发明克隆的猪异柠檬酸脱氢酶基因IDH3β的启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示。本发明为猪的遗传改良应用提供了基因资源。

公开(公告)号：CN102453716A

公开(公告)日：2012-05-16

申请号：CN201010518585.8

申请日：2010-10-21

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  刘京鸽

IPC: C12N15/113 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及到猪的骨骼肌特异性表达基因α-actin的不同长度启动子区域的分离鉴定和功能验证。从猪的基因组中克隆了骨骼肌特异表达基因α-actin(GeneBank登录号为100154254)上游八个个不同长度的启动子，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2-SEQ ID NO：9所示；结果表明长度为249bp的区域具有独立的启动活性兼肌肉组织特异性，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：9所示。本发明同时公开了八个不同缺失启动子片段的获得、相应重组表达载体的制备方法及双荧光素酶活性检测系统对启动子活性分析的应用。

公开(公告)号：CN112111428A

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN202011028061.0

申请日：2020-09-26

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郑嵘 ,  韩珍珍 ,  杨旭晨 ,  刘建华 ,  李宇飞 ,  蒋思文 ,  柴进

IPC: C12N1/20 ,  C12N9/42 ,  C12P19/02 ,  C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于微生物领域，公开了一种人工诱变得到的热葡糖苷酶地芽孢杆菌及在纤维素降解中的应用，申请人自猪尸体和秸秆堆肥高温时期的样品分离出一株纤维酶酶活性最高的菌株Geobacillus thermodenitrificans，经高温驯化，紫外诱变后，获得了一株高产纤维素酶的热葡糖苷酶地芽孢杆菌，该菌株的保藏编号：CCTCC NO：M2020324，本发明首次报道的具有纤维素酶活的热葡糖苷酶地芽孢杆菌BGSC95A1。可利用多种碳源，对多种纤维素都具有降解作用，且发酵生产的发酵液中纤维素酶酶浓度高。

公开(公告)号：CN106119182B

公开(公告)日：2019-10-29

申请号：CN201610527504.8

申请日：2016-07-06

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭健 ,  刘文亭 ,  周忠新 ,  王俊 ,  魏宏逵 ,  蒋思文

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12P21/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种产肠毒素大肠杆菌K88黏附素蛋白FaeG的可溶性表达重组菌，先构建表达产肠毒素大肠杆菌K88黏附素FaeG基因的重组质粒pET28a–FaeG，然后将重组质粒pET28a–FaeG与分子伴侣GroEL/GroES载体质粒pGro7共转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态中，获得共表达黏附素FaeG基因和分子伴侣GroEL/GroES基因的重组菌，本发明还公开了该重组菌的高密度发酵培养方法。本发明所提供的重组菌具有较高的黏附素蛋白FaeG可溶性表达水平，包涵体表达量明显降低，能够获得较高纯度的免疫原，并且获得的蛋白与理论蛋白具有较高一致性。

公开(公告)号：CN104789584B

公开(公告)日：2018-06-08

申请号：CN201410024763.X

申请日：2014-01-20

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭健 ,  王荣 ,  蒋思文 ,  潘中勉

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12 ,  C12P21/02 ,  C07K1/113

Abstract: 本发明公开了一种人源肠毒素大肠杆菌粘附素EtpA融合蛋白及其应用，本发明提供了一种含有人源肠毒素大肠杆菌的粘附素基因的重组质粒pGEX‑etpA，将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pGEX‑etpA表达融合蛋白EtpA。利用表达的重组蛋白主动免疫初产蛋鸡，制备了针对这种蛋白的卵黄抗体，提取的卵黄抗体验证了重组蛋白具有良好的抗原性，并利用小鼠肠道攻毒试验及体外实验，证明提纯的卵黄抗体能够抑制ETEC菌株在小鼠肠道内及体外对上皮细胞的粘附。

公开(公告)号：CN105039340A

公开(公告)日：2015-11-11

申请号：CN201510347481.8

申请日：2015-06-22

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 蒋思文 ,  马娟娟 ,  彭健 ,  柴进 ,  李凤娥

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明属于动物基因工程领域，涉及一种猪的骨骼肌特异性表达基因Myf6的启动子区域在模式动物转基因鼠活体水平验证的应用。对构建的真核表达载体pSV40-Myf6-MyoDEGFP-N1进行线性化处理，显微注射制备转基因小鼠。通过对阳性转基因鼠不同组织中MyoD基因表达情况验证，构建组织表达谱，且通过验证转基因鼠与野生型鼠骨骼肌中MyoD在mRNA和蛋白水平表达情况，发现Myf6基因启动子可以特异性的上调MyoD基因在骨骼肌中的过表达。通过肌肉组织切片观察肌纤维的生长状况，发现转基因鼠肌肉组织切片的肌纤维面积和直径显著性高于野生型鼠，单位面积内肌纤维的密度显著低于野生型鼠。

公开(公告)号：CN104789589A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201410024751.7

申请日：2014-01-20

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭健 ,  潘中勉 ,  蒋思文 ,  王荣

IPC: C12N15/85 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  C07K1/14 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种猪源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白3FliCon融合蛋白及其应用，本发明提供了一种猪源ETEC3个拷贝基因fliC的重组质粒pRSET-3FliCon。将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pRSET-3FliCon表达融合蛋白3FliCon。利用表达的重组蛋白主动免疫新西兰雄兔，制备了针对这种蛋白的血清抗体，验证了重组蛋白具有良好的抗原性，培养肠上皮细胞系IPEC-J2，利用抑制粘附试验，证明了猪源ETEC鞭毛在参与粘附小肠上皮细胞过程中起重要作用。利用该融合蛋白制备的鸡卵黄抗体能抑制ETEC在体外对上皮细胞的粘附，且抑制不同血清型的ETEC菌株。

公开(公告)号：CN103750038A

公开(公告)日：2014-04-30

申请号：CN201410012025.3

申请日：2014-01-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭健 ,  邹轶 ,  魏宏逵 ,  蒋思文

IPC: A23K1/18 ,  A23K1/16 ,  A01K67/02

Abstract: 本发明公开了止痢草油在制备抗育肥猪运输应激的饲料预混剂中的应用，本发明还公开了一种抗育肥猪运输应激的饲料预混剂及一种抗育肥猪运输应激的方法，所述抗育肥猪运输应激的饲料预混剂中含有止痢草油，所述方法是从育肥猪宰前一个月起，向猪饲料或饲粮中加入0.1-1‰的抗育肥猪运输应激的饲料预混剂。本发明可以改善宰前育肥猪的生产性能，提高宰前育肥猪平均日增重和降低料肉比，具有缓解宰前运输而造成的育肥猪应激反应、肉质下降和运输失重增加的作用，与传统抗应激添加剂相比，其作为一种抗育肥猪运输应激预混剂在缓解育肥猪宰前应激具有明显的优势。

公开(公告)号：CN103114093A

公开(公告)日：2013-05-22

申请号：CN201110361801.7

申请日：2011-11-16

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 李凤娥 ,  孙晓杰 ,  梅书棋 ,  陶虎 ,  彭先文 ,  苏丽娜 ,  蒋思文 ,  邓昌彦 ,  熊远著

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于猪遗传标记制备与应用技术领域。具体涉及猪连环蛋白α样1CTNNAL1编码基因第14外显子的单核苷酸多态性(SNP)检测技术领域。其步骤包括：从猪血液中提取基因组DNA，设计引物，PCR扩增，PCR产物克隆、测序，序列比较分析，单核苷酸多态性检测，标记与产仔数性状间相关性分析。本发明公开了猪CTNNAL1基因第14外显子的DNA序列和SNP分型的检测技术。本发明的遗传标记的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示，在序列表SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3序列646位碱基处有一个碱基突变C/G，并导致AluI-RFLP多态性。本发明公开了该遗传标记的制备方法及其在猪产仔数标记辅助选择中的应用。

公开(公告)号：CN101307104B

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN200810048379.8

申请日：2008-07-11

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭健 ,  苟钟勇 ,  蒋思文 ,  罗何峰

IPC: C07K14/595 ,  C12N1/21 ,  C12N15/16 ,  C12N15/70 ,  C07K16/02 ,  A23K1/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种包含Z9CCK蛋白的重组大肠杆菌及卵黄抗体与应用，一种经大肠杆菌偏爱密码子优化后的猪胆囊收缩素-33(CCK-33)基因多串联体重组质粒的构建，猪CCK-33多串联体重组蛋白在大肠杆菌中的表达，Z9CCK(猪CCK-33九串联体)重组蛋白的纯化及其在制备卵黄抗体制品中的应用。利用多串联体构建技术等基因工程技术构建了重组质粒pRSET-Z9CCK，将所述的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，诱导重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/pRSET-Z9CCK表达Z9CCK蛋白，从3个方面验证了Z9CCK重组蛋白具有良好的抗原性。利用所述的Z9CCK重组蛋白主动免疫生长肥育猪，研究了其对猪生长性能及部分血液生化指标的影响；利用所述的Z9CCK重组蛋白主动免疫产蛋鸡，制备了CCK卵黄抗体全蛋粉，利用所述的CCK卵黄抗体提高哺乳期母猪的采食量、仔猪的生长性能。