公开(公告)号：CN109536456A

公开(公告)日：2019-03-29

申请号：CN201811261025.1

申请日：2018-10-26

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) ,  哈尔滨维科生物技术开发公司

Inventor： 蔡雪辉 ,  孙明霞 ,  涂亚斌 ,  王淑杰

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验鉴定所得到的单克隆抗体3H9的特异性，结果表明该单克隆抗体可以特异性识别PCV2病毒粒子，并且能够与PCV2 VLPs反应，而不与线性cap蛋白包被的ELISA板反应。因此，本发明建立了一种可以同时定性和定量分析PCV2 VLPs的简便方法，解决了PCV2 VLP粒子结构检测仪器昂贵，操作困难以及定量方法不能区分非特异性蛋白和破碎亚基的问题。

公开(公告)号：CN102634525A

公开(公告)日：2012-08-15

申请号：CN201210128807.4

申请日：2012-04-27

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 蔡雪辉 ,  涂亚斌 ,  武嘉男

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C07K14/01

Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因、表达载体的构建及其蛋白高效表达的方法。本发明的一种经改造后的猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因其序列如SEQ ID NO.1所示，本发明同时公开了其蛋白的制备方法，具体涉及猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因的改造、基因的克隆及在毕赤酵母中的高效表达、蛋白收获时间及方法、蛋白含量及抗原性检测、扩大培养条件等操作方法的改进等步骤。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒II型衣壳蛋白在毕赤酵母中稳定高效表达，在试管或摇瓶中表达量大于218mg/L，为猪圆环病毒II型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了基础。

公开(公告)号：CN112011556B

公开(公告)日：2022-03-08

申请号：CN202010780803.9

申请日：2020-08-06

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) ,  哈尔滨维科生物技术有限公司

Inventor： 蔡雪辉 ,  涂亚斌 ,  王刚 ,  孙明霞

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/01 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。

公开(公告)号：CN111471102B

公开(公告)日：2021-08-31

申请号：CN202010325058.9

申请日：2020-04-23

Applicant: 西北农林科技大学 ,  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 周恩民 ,  张桂夕 ,  张璐 ,  蔡雪辉 ,  涂亚斌 ,  王刚

IPC: C07K16/08 ,  C12N15/13 ,  C12N15/81 ,  C12P21/02 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明适用于生物技术领域，提供了一种编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用，该抗独特型纳米抗体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。该抗独特型纳米抗体是通过噬菌体展示技术成功筛选到所需抗独特型纳米抗体的编码基因，接着，将该编码基因连接到毕赤酵母表达载体中，并电转化至毕赤酵母感受态细胞培养制得的。该抗独特型纳米抗体能够特异性地阻断单抗1E7与PCV2 Cap蛋白的结合，具有模拟PCV2 Cap关键抗原表位的作用，其可用于开发防治PCV2的抗独特性纳米抗体疫苗、诊断试剂及生物试剂等。

公开(公告)号：CN112011556A

公开(公告)日：2020-12-01

申请号：CN202010780803.9

申请日：2020-08-06

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) ,  哈尔滨维科生物技术有限公司

Inventor： 蔡雪辉 ,  涂亚斌 ,  王刚 ,  孙明霞

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/01 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。

公开(公告)号：CN106520807A

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201611169628.X

申请日：2016-12-16

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 涂亚斌 ,  蔡雪辉 ,  王刚 ,  刘永刚

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C07K19/00 ,  A61P31/12 ,  A61P37/02 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种胸腺素α1-猪干扰素α融合蛋白基因及其重组蛋白的制备方法。本发明的经改造后的胸腺素α1-猪干扰素α融合蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明同时公开了该基因表达的重组蛋白制备及活性检测的方法，具体涉及胸腺素α1-猪干扰素α融合蛋白基因的改造、基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达、重组蛋白的制备和发酵培养条件，以及活性检测方法等操作方法的改进等步骤。本发明简单易行，成本较低，实现了胸腺素α1-猪干扰素α融合蛋白在毕赤酵母中高效稳定分泌表达，表达的重组融合蛋白具有高水平的抗病毒活性和调节免疫细胞活性，为提供具有治疗猪病毒性疾病及免疫调节功能的绿色无残留生物制品奠定了基础。

公开(公告)号：CN101724636B

公开(公告)日：2012-09-05

申请号：CN200810171258.2

申请日：2008-10-30

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 于力 ,  王海伟 ,  杨德成 ,  涂亚斌 ,  周国辉

IPC: C12N15/42 ,  C12N15/79 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开了Asial型江苏谱系口蹄疫病毒感染性cDNA及其构建方法和应用。所述感染性cDNA包含了保证合成转录本具有感染性所要求的poIy(A)序列和poIy(C)序列，所述poIy(A)尾具有19-22个A；所述poIy(C)结构具有14-20个聚合C；其5’末端具有T7RNA聚合酶启动子序列，3’末端具有单一的限制性酶切位点。所述感染性cDNA可以和表达T7RNA聚合酶的真核表达载体组成反向遗传操作系统。该感染性cDNA及其反向遗传操作系统可用于拯救口蹄疫病毒，为研究口蹄疫病毒基因的结构与功能、病毒的分子致病机理、开发口蹄疫病毒减毒疫苗株和新型口蹄疫疫苗等奠定了实验基础。