利用Cas9切割核酸酶介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法

    公开(公告)号:CN107619837A

    公开(公告)日:2018-01-23

    申请号:CN201710855259.8

    申请日:2017-09-20

    Abstract: 本发明公开了一种利用Cas9切割核酸酶介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法,本发明通过电穿孔的方法将供体载体和针对打靶位点的CRISPR/Cas9表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞,供体载体中MSR1启动子可以使Ipr1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达,嘌呤霉素药物筛选后,经过PCR鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。以该转基因阳性克隆细胞为核供体,获得转基因克隆胚胎,进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内,最终获得成活的Ipr1定点插入转基因克隆牛。

    通用RGEN基因编辑靶位点快速筛选系统

    公开(公告)号:CN107145767A

    公开(公告)日:2017-09-08

    申请号:CN201710250569.7

    申请日:2017-04-17

    Inventor: 张涌 陈奇 佟琪

    CPC classification number: G06F19/22

    Abstract: 本发明公开了一种通用RGEN基因编辑靶位点快速筛选系统。本发明通过“流水‑管道”设计思想,设计了碱基模式匹配模块、GC含量分析模块、连续n个相同碱基识别模块,形成了一个兼容性强、方便快捷并且适用于大规模数据分析的系统。支持任意模式序列在全基因组范围的匹配与查找,有效应对RNA介导核酸内切酶的快速发展。极大改善目前现有核酸内切酶工具仅能以有限模式和低通量筛选靶位点的现状。另外,本系统的模块构架及相关算法也适用于解决从任意长度字符串中抓取特定要求的子字符串这一类问题。

    用于牛、羊X/Y精子快速分离的UTY抗体纳米颗粒的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN105646707A

    公开(公告)日:2016-06-08

    申请号:CN201610107323.X

    申请日:2016-02-26

    Inventor: 华松 张涌 付明哲

    Abstract: 本发明公开了一种用于牛、羊X/Y精子快速分离的UTY抗体纳米颗粒的制备方法及应用:利用Y精子UTY抗原重组蛋白制备抗Y精子UTY抗原的单克隆抗体;将所述单克隆抗体用胃蛋白酶进行酶切,并分离得到抗UTY抗原的Fab’片段;制备包含Fab’片段的磷酸钙纳米颗粒。本发明制备得到的UTY抗体纳米颗粒,具有在Y精子表面和进入其内部进行抗原抗体反应的能力,从而导致Y精子凝集,对X、Y精子的分离效率达到80~95%,具有X、Y精子分离简单、快速、廉价及效率高等特点,且损害极小。

    一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞

    公开(公告)号:CN103215295B

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201310126017.7

    申请日:2013-04-11

    Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞,包括目的基因Lys,在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂,以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700~850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞,经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞,以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞,获得转基因克隆胚胎,为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。

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