一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法

    公开(公告)号:CN105543164A

    公开(公告)日:2016-05-04

    申请号:CN201610112297.X

    申请日:2016-02-29

    CPC classification number: C12N5/0631 C12N2509/00

    Abstract: 本发明公开了一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法:将泌乳期奶牛的乳腺组织剪切成组织块后用胶原酶/透明质酸酶消化液消化,将消化后呈乳糜状的组织块接种在培养皿进行培养,1~2天后组织块周围即有细胞游离出组织并贴壁生长,之后培养期间,每天采用机械刮除法去除梭形样成纤维细胞,直至大约4~5天后大量铺路石样乳腺上皮细胞成簇成片生长并互相融合时进行首次传代。首次传代时利用差速消化法使用胰蛋白酶消除可能混杂的极少量成纤细胞,即得到纯度很高的奶牛乳腺上皮细胞。本方法中乳腺上皮细胞可以在短时间从乳糜状组织中迁出;并且主要采用机械刮除法去除少量混杂的成纤维细胞污染,因此获得的乳腺上皮细胞损伤小、纯度高。

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