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公开(公告)号：CN116694589A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310663759.7
申请日：2023-06-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶的突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行单点突变、两两复合突变和三点复合突变，经筛选获得复合突变体T189V/V207M，在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点，通过定点饱和突变，提高7β‑HSDH的催化效率以及热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P、T189V/V207M/M144H、T189V/V207M/G146A、T189V/V207M/A158S、T189V/V207M/V183I。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.8倍，突变后的7β‑HSDH突变体在催化100g·L‑1的7‑酮基‑石胆酸转化率可达到91％，具有工业化生产前景。
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公开(公告)号：CN114736918B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210356043.8
申请日：2022-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种整合表达生产红景天苷的重组大肠杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明采用E.coli YMGR5A作为宿主菌株，整合表达了来源于拟南芥的糖基转移酶基因UGT85A1，即在宿主菌株中，在不同位点整合表达的UGT85A1基因，获得多拷贝数的产红景天苷重组大肠杆菌菌株；E.coli 5A8S菌株在装有50mL M9Y培养基的250mL摇瓶发酵后，红景天苷的产量为2.42g/L。在装有2.5L M9Y培养基的5L发酵罐发酵后，红景天苷最高产量为9.34g/L，单位菌体浓度的产量为0.27g/(L·OD600)，而且该整合表达菌株相比质粒表达菌株而言，具有良好的遗传稳定性和生长状况。
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公开(公告)号：CN114277040B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202111597793.6
申请日：2021-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成β‑胡萝卜素菌株的构建方法及其应用，属于代谢工程领域。所述构建方法为将β‑胡萝卜素合成途径中从乙酰辅酶A到甲羟戊酸合成相关基因在酵母细胞质中表达，从IPP和DMAPP到β‑胡萝卜素合成相关基因在酵母过氧化物酶体中过表达，从甲羟戊酸到IPP和DMAPP合成相关基因在细胞质或过氧化物酶体中过表达。利用该方法构建的工程菌株β‑胡萝卜素产量显著提高。本发明构建的基因工程菌株经过9天发酵后发酵液中菌体干重可达213g/L，β‑胡萝卜素产量可达6.5g·L‑1。本发明构建的工程菌株可以高效合成β‑胡萝卜素，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN114410631B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202210091687.9
申请日：2022-01-26
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/81 , C12N1/19 , C12P7/02 , C12R1/74
Abstract: 本发明公开了一种高效合成西柏三烯一醇菌株的构建方法及其应用，属于代谢工程领域。所述构建方法为将西柏三烯一醇合成途径中从乙酰辅酶A到甲羟戊酸合成相关基因在酵母细胞质中表达，从IPP和DMAPP到西柏三烯一醇合成相关基因在酵母过氧化物酶体中过表达，从甲羟戊酸到IPP和DMAPP合成相关基因在细胞质或过氧化物酶体中过表达。利用该方法构建的工程菌株西柏三烯一醇产量显著提高。本发明构建的基因工程菌株经过9天发酵后西柏三烯一醇产量可达1391.3mg·L‑1。本发明构建的工程菌株可以高效合成西柏三烯一醇，并且生产性能稳定，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN116478845A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310442613.X
申请日：2023-04-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造热带假丝酵母生产鼠尾草酸的方法，属于生物技术领域。本发明通过模块区室化、融合基因表达、下调分支代谢途径、提高电子供体等代谢改造策略，采用热带假丝酵母1C2P‑PM04作为宿主菌株，在其基因组GRE3位点上整合下游鼠尾草酸模块。将该菌株接种于装有30ml YPD60发酵培养基的250mL摇瓶发酵4天后，鼠尾草酸产量为78.24mg/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114196689B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111596810.4
申请日：2021-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产α‑蛇麻烯的酵母重组菌株的构建方法及其应用，属于代谢工程领域。本发明通过在热带假丝酵母的染色体DNA上整合表达植物来源的α‑蛇麻烯合酶基因构建了可以合成α‑蛇麻烯的工程菌株，在此基础上过表达内源性的涉及α‑蛇麻烯合成基因，构建高效生产α‑蛇麻烯的重组菌株，α‑蛇麻烯产量达到149.7mg·L‑1，较对照菌株提高了112倍。本发明还提供了利用上述工程菌株生产α‑蛇麻烯方法。本发明提供的α‑蛇麻烯生产菌株生产性能稳定，生产过程不需要添加抗生素，具有良好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN116463273A
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202310240468.7
申请日：2023-03-14
Applicant: 江苏香地化学有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了增强5’‑胞苷酸积累的方法及应用，属于基因工程和微生物工程领域。本发明通过敲除ppnN、ushA、yrfG、yjjG、umpH、umpG基因，过量表达5’‑CTP二磷酸水解酶基因nudG，乳清酸磷酸核糖转移酶基因pyrE，整合表达尿苷酸激酶突变体基因PyrH(R92G/D93G)，并进一步敲除胞苷脱氨酶基因cdd、核糖核苷三磷酸还原酶基因nrdD，整合表达尿苷‑胞苷激酶基因udk、磷酸核糖焦磷酸合成酶基因prs、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因zwf和6‑磷酸葡糖酸脱氢酶基因，提高大肠杆菌的5’‑胞苷酸积累能力。在不添加任何抗生素和诱导剂的条件下，重组菌在60L发酵罐中5’‑胞苷酸产量达到39.6g/L。
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公开(公告)号：CN112813013B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202110176003.0
申请日：2021-02-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产羟基酪醇的重组大肠杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明采用E.coli YMGR5A作为宿主菌株，表达了大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中4‑羟苯基乙酸羟化酶基因HpaBC(GenBank登录号：CP053601.1)，即在宿主菌株基因组中，删除poxB基因并在该位点整合HpaBC基因，获得羟基酪醇高产菌株E.coli YMGRD1H1。采用本发明提供的重组大肠杆菌E.coli YMGRD1H1在葡萄糖的培养基中发酵生产羟基酪醇的产量可高达2.95g/L。
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公开(公告)号：CN112410236B
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202011322518.9
申请日：2020-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种类大牻牛儿烯合成酶C突变体及构建方法与应用，属于生物催化技术领域。本发明采用重组DNA技术将类大牻牛儿烯合成酶C编码基因，将其克隆至表达载体，并转化宿主，获得一株高产类大牻牛儿烯合成酶C的重组菌株。针对类大牻牛儿烯合成酶C活性位点E474周围loop结构上的氨基酸残基进行定向进化，筛选获得高活性类大牻牛儿烯合成酶C突变体。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯醇的产品中的应用。采用本发明获得的高活性类大牻牛儿烯合成酶C突变体及方法可高效催化生产西柏三烯醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN114806910A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210187114.6
申请日：2022-02-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产L‑柠檬烯的热带假丝酵母工程菌及其构建方法，属于微生物技术领域。本发明以热带假丝酵母ATCC 20336为出发菌株，将来源于绿薄荷的柠檬烯合成酶和定点突变后的法尼基焦磷酸合成酶通过CRISPR‑Cas9技术整合至热带假丝酵母CU‑200的基因组上。经过表达后，重组热带假丝酵母的L‑柠檬烯产量达到了141.48mg/L。本发明的制备方法具有成本低、效率高、操作简易、前景广等特点。
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