一种基于单引物探针捕获检测微生物目标序列的方法

    公开(公告)号:CN109486922A

    公开(公告)日:2019-03-19

    申请号:CN201710805585.8

    申请日:2017-09-08

    Inventor: 宫艳萍 马珍子

    CPC classification number: C12Q1/6869 C12Q2565/519 C12Q2525/191 C12Q2535/122

    Abstract: 一种基于单引物探针捕获检测微生物目标序列的方法,包括:将包含微生物目标序列的DNA样本片段化,然后进行末端修复;将末端修复后的DNA片段连接接头;使用单引物探针与靶序列的探针结合位点退火并延伸以进行靶序列捕获,其中探针结合位点位于靶序列的上游或下游,单引物探针包括探针序列部分和位于探针序列部分5’端的公共序列部分;使用一对通用PCR引物对捕获的靶序列进行扩增;对扩增产物进行测序分析。本发明的方法省去洗脱进行目的片段分离,简化操作步骤,减少目的片段不必要的损失,且杂交时间相对较短,适合快速检测需求;单引物探针即可进行捕获,减少前期探针设计的复杂度;扩增时采用公用引物去除不同引物富集产生的不均一性。

    一种用于肿瘤个体化用药16个基因热点检测的杂交捕获试剂盒及其方法

    公开(公告)号:CN107858426A

    公开(公告)日:2018-03-30

    申请号:CN201710726323.2

    申请日:2017-08-22

    Abstract: 本发明公开的一种用于肿瘤个体化用药16个基因热点检测的杂交捕获试剂盒,包括杂交用试剂、PCR扩增试剂及富集度检测试剂;其中所述杂交用试剂包括如下SEQ NO.1-SEQ NO.396探针混合物,且每条探针之间的摩尔数比均为1:1,检测时,浓度为10nM each的上述探针混合物用量为1μl。本发明的试剂盒是基于二代测序技术的基因检测,可一次性检测3种变异类型(突变、插入缺失、融合),同时应用高测序深度覆盖微量基因变异,从而在样本有限的前提下精准检测患者的突变情况,可准确检测1%的突变频率。一方面,多基因高敏感性的平行检测提升了可用药基因变异的检出率,不错失用药的机会;另一方面,可在一次检测中同时检出热点、罕见甚至是未知的基因变异,在发现药物敏感性突变的同时检测相关的耐药突变(如KRAS和ALK点突变),准确地反映患者用药后的敏感及耐药信息。

    一种白血病驱动基因的高通量检测方法

    公开(公告)号:CN107723353A

    公开(公告)日:2018-02-23

    申请号:CN201610664448.2

    申请日:2016-08-12

    CPC classification number: C12Q1/6869 C12Q2535/122 C12Q2565/519 C12Q2531/113

    Abstract: 本发明公开了一种白血病基因突变和基因融合的高通量检测方法,本方法选取目前白血病最常见的突变基因和融合基因,结合第二代高通量测序技术,更全面的检测白血病的基因突变和融合情况。第二代高通量测序技术比目前多采用经典的Sanger测序方法检通量大、测序时间段、精确度高、费用低和信息量丰富,可以在短时间内对目标基因进行精确定位和分析。本方法在高通量检测技术的帮助下,可以为临床医生提供更为详尽的基因突变和融合谱来综合判断白血病的预后、指导个性化治疗。

    一种循环肿瘤DNA肺癌驱动基因的高通量检测方法

    公开(公告)号:CN107723351A

    公开(公告)日:2018-02-23

    申请号:CN201610661854.3

    申请日:2016-08-12

    CPC classification number: C12Q1/6869 C12Q2535/122 C12Q2565/549 C12Q2565/519

    Abstract: 本发明公开了一种循环肿瘤DNA肺癌驱动基因的高通量检测方法,本方法选取目前肺癌最常见的突变基因,结合第二代高通量测序技术,更全面的检测肺癌的基因突变情况。由于采用患者的血浆样本,因此,本方法可以极大的降低患者检测的创伤;其次、对22个肺癌基因进行全外显子检测,比基于real-time PCR和一代Sanger测序技术平台的检测方法更全面;由于只对22个基因进行检测,能以更高的测序深度对样本进行检测,因此,检测的精度可以达到0.1%。从而为患者的更多、更优的个体化精准治疗方案提供参考。

    一种用于检测低拷贝结核分枝杆菌的核酸提取试剂、试剂盒及其方法

    公开(公告)号:CN106967828A

    公开(公告)日:2017-07-21

    申请号:CN201710349783.8

    申请日:2017-05-17

    Inventor: 齐飞虎 董振国

    Abstract: 本发明涉及一种用于检测低拷贝结核分枝杆菌的核酸提取试剂,其包括含有SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:2所示序列的捕获引物的裂解液;本发明还涉及包括上述核酸提取试剂的试剂盒及其检测方法,所述试剂盒包括冻干粉型荧光PCR反应体系,该反应体系包括如SEQ ID NO:3‑SEQ ID NO:4所示序列的结核分枝杆菌扩增引物和如SEQ ID NO:5所示的结核分枝杆菌扩增探针、冻干骨架、冻干保护剂、dNTPs和酶混合液。本发明通过优化结核分枝杆菌核酸的提取过程,尽量减少对荧光PCR产生的干扰物质,能够针对多种样本应用荧光PCR技术完成对低拷贝结核分枝杆菌核酸的检测;同时通过将结核分枝杆菌检测体系冻成干粉状,最大程度上增加荧光PCR的上样量,增强了结核分枝杆菌的检测出率。

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