应用重组胸苷激酶酶法合成2’-脱氧嘧啶核苷酸

    公开(公告)号:CN104560838A

    公开(公告)日:2015-04-29

    申请号:CN201310466856.3

    申请日:2013-10-09

    申请人: 丁庆豹

    发明人: 万群 丁庆豹

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种以DNA重组技术构建高效表达的胸苷激酶的基因工程菌,并涉及利用该基因工程菌所产的胸苷激酶合成2’-脱氧嘧啶核苷酸的方法。本发明的技术方案包括利用重组DNA技术,构建胸苷激酶的表达载体,并转至大肠杆菌,得到高效表达胸苷激酶的基因工程菌。以该工程菌所产的胸苷激酶作为酶源,由胸苷、2’-脱氧尿苷及2’-脱氧-5-氟尿苷合成相应的2’-脱氧核苷酸。利用本发明的方法,具有简单,高效,对环境友好,适合于工业化生产。

    一种逆转录病毒载体介导HSV1的方法

    公开(公告)号:CN107779460A

    公开(公告)日:2018-03-09

    申请号:CN201610715466.9

    申请日:2016-08-25

    申请人: 杨美宁

    发明人: 杨美宁

    摘要: 一种逆转录病毒载体介导HSV1的方法,用DNA重组技术将单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1tk)定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN,并用限制性内切酶进行酶切及测序鉴定;用PolyFect Transfection试剂介导重组逆转录病毒转染入包装细胞系PT67,通过G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染人胃癌细胞,检测HSV1tk自杀基因治疗系统在体外的抗肿瘤效应。经酶切鉴定和DNA序列测定,HSV1tk基因成功定向插入到pLXSN载体中;重组病毒DNA转染包装细胞,筛选出对G418具稳定抗性的克隆PT67/tk,扩大培养,获取病毒滴度为4×104cfu/mL的重组逆转录病毒培养液;感染胃癌细胞SGC7901后再筛选出G418抗性克隆株SGC7901/tk。丙氧鸟苷(GCV)对SGC7901/tk有明显杀伤作用,对SGC7901无明显毒性,证明该病毒表达HSV1tk基因具有生物活性。