一株重组大肠杆菌及其在制备具有人血型B抗原活性的N‑糖蛋白中的应用

    公开(公告)号:CN106085933A

    公开(公告)日:2016-11-09

    申请号:CN201610403292.2

    申请日:2016-06-06

    Applicant: 山东大学

    CPC classification number: C07K14/245 C07K14/205 C07K14/4713 C12N9/1081

    Abstract: 本发明公开了一株重组大肠杆菌,命名为重组大肠杆菌CEBO86,是将构建的重组质粒pACT3‑PglB和pBAD24‑malEM共转化已缺失waal基因的大肠杆菌CLM24中获得,该重组大肠杆菌的基因型为CLM24/p‑pglB+p‑malEM,有能同时表达PglB和malEM基因的功能。利用本发明所述重组大肠杆菌能够发酵制备具有人血型B抗原活性的N‑糖蛋白,且生产步骤简单,生产周期短,产量高,生产成本低,可实现N‑糖蛋白的大规模生产;制备获得的N‑糖蛋白具有良好的B抗原活性,可高效吸附人血浆中的抗B抗体,为通用血产品的制备提供新的选择方案,同时,可用于血型不兼容的器官移植,具有良好的工业开发和应用前景。

    一种产唾液酸乳糖大肠杆菌工程菌株的构建方法

    公开(公告)号:CN107904253A

    公开(公告)日:2018-04-13

    申请号:CN201710962719.7

    申请日:2017-10-17

    Abstract: 本发明公开一种产唾液酸乳糖大肠杆菌工程菌株的构建方法,包括:敲除大肠杆菌中聚唾液酸转移酶基因(neuS)和敲除β-半乳糖苷酶基因(lacZ),获得ΔneuSΔlacZ双缺陷型的菌株;敲除分解N-乙酰神经氨酸相关的基因簇(nanKETA),获得ΔneuSΔlacZΔnanKETA缺陷型的菌株;将重组质粒pXC1k-Nst转化到其中,得到菌株K1-KETA-pNst。本发明所提供的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株K1-KETA-pNst,已于2017年10月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为:CGMCC),保藏号为:CGMCC No.14825,保藏单位地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明的优点是不需要引入合成并活化唾液酸的基因,直接利用细胞自身的资源,简单可行,成本低,产率高。

    含有唾液酸的糖链的制造方法

    公开(公告)号:CN103502462B

    公开(公告)日:2016-08-10

    申请号:CN201280011234.5

    申请日:2012-02-27

    Abstract: 已知唾液酸以α2,3连接或α2,6连接于糖链的非还原末端的糖链的重要性,存在对此糖链化合物的工业化生产的需求。尤其,在例如制造糖蛋白药物时,在控制唾液酸的连接模式(α2,6连接或α2,3连接)的同时,大规模生产均一结构的糖链是不可或缺的。对于3分支型或4分支型的N?型复合型糖链,一般认为难以化学合成在所有的非还原末端均具有唾液酸的糖链,目前尚未报道过化学合成的该糖链。酶学上亦难以有效率地制备此糖链。本发明中,新发现唾液酸转移酶具有在CMP存在下分解反应产物中的唾液酸的活性,发现可通过酶而分解CMP,从而有效率地制造含唾液酸的糖链。进而还发现,对于传统上难以合成的以α2,6连接加成四分子唾液酸的4分支N?型糖链,可以以2分支型糖链为原料,进行糖链延长反应,在不进行各步酶反应后的纯化的情况下,以一锅法合成而高产率地进行制备。

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