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公开(公告)号：CN107083355A
公开(公告)日：2017-08-22
申请号：CN201710261663.2
申请日：2017-04-20
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/073 , C12N5/0735 , C12N5/074 , C12N5/077
CPC classification number: C12N5/0656 , C12N5/0603 , C12N5/0606 , C12N5/0696 , C12N2500/84
Abstract: 本发明提供一种饲养层细胞及其制备方法，该方法包括以下步骤：（1）细胞的培养：将小鼠成纤维细胞接种在培养皿中，加入培养液进行培养，在细胞密度达到80‑90%时，停止培养，得到培养的细胞；（2）采用甲醇处理：取出培养皿，去掉培养液，将培养的细胞用磷酸盐缓冲液清洗，然后去掉磷酸盐缓冲液，加入甲醇，室温下放置5min后，去掉甲醇，在超净工作台上静置3‑6min，用封口膜将培养皿封口，即得到饲养层细胞。本发明还提供采用该饲养层细胞进行多能干细胞培养的应用。该方法具有简单、省时、成本低廉的优点，制备得到的饲养层细胞可重复利用，还能避免交叉污染。
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公开(公告)号：CN102094036A
公开(公告)日：2011-06-15
申请号：CN201010592737.9
申请日：2010-12-13
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法，该系统由pGT-V1和pGT-V2两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的LoxP元件，其间分别含有正筛选标记基因Neo/GFP和Hyg/RFP，外侧含有一个负筛选标记基因TK。同时设计两个“8碱基”多克隆位点分布在两个LoxP元件与负筛选标记之间以供同源臂的插入。本发明构建的打靶载体系统将两个互补的打靶载体共转染受体细胞，经过药物和荧光双筛选标记的选择，一次性实现对靶基因两个等位基因的遗传修饰或敲除，并且可以通过转入Cre酶与LoxP元件相互作用去除整合到基因组上的筛选标记基因，能够缩短获得纯合敲除靶细胞的时间，提高转基因动物的安全性，为开展动物转基因研究提供有价值的技术平台。
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公开(公告)号：CN103333920A
公开(公告)日：2013-10-02
申请号：CN201310241312.7
申请日：2013-06-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/867 , C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种建立猪iPS细胞系的培养基及其培养方法，经过OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC四个转录因子进行转染，并通过培养基的诱导培养，第9天时出现典型的猪iPS细胞能够高效获得猪iPS细胞；所获得的猪iPS细胞克隆为扁平的克隆，边缘整齐，和人的ES细胞形态相似。本发明构建的猪iPS细胞系，传代培养的猪iPS细胞能保持不分化的状态，经AP染色显示结果为阳性，具有多能性标记，在体外、体外分化后的细胞表达NCSTN（内胚层）、NESTIN（外胚层）及DESMIN（中胚层）。
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公开(公告)号：CN101798566B
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201010013576.3
申请日：2010-01-08
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明提供了一种猪羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行机械分离纯化；3)检测并将分离纯化后的羊水干细胞进行培养，建立猪羊水干细胞系，本发明提供了一种快速、有效、安全、分离猪羊水干细胞的方法，可为组织工程研究提供新的种子细胞来源以及有望作为种子细胞从事科研和生产应用。
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公开(公告)号：CN102660552B
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201110458380.X
申请日：2011-12-30
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一种牛白细胞介素32γ亚型的分子克隆/稳转细胞系的建立及方法，将该基因在牛基因组中定位，并初步验证功能；用人的IL32基因序列在在NCBI及牛基因组数据库中进行序列比对，找出牛IL-32γ的构型，并在牛脾脏组织中进行分子克隆，该克隆出的基因序列已被NCBI收录(GenBank序列号为JQ327711，未经公布)；然后构建一种包含该牛IL-32γ的表达载体pIRES-IL32γ-GFP，以及一种基于该载体的包含牛IL-32γ基因的小鼠巨噬细胞系RAW264.7，验证牛IL-32γ具有诱导IL-1β、IL-6、MIP2、TNFα等细胞因子的功能。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102559749A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201010603533.0
申请日：2010-12-17
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法，构建了一种包含NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体pSP-NRAMP1-HA，以及一种基于该载体的包含NRAMP1基因的秦川牛成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞的方法，为解决秦川牛布氏杆菌病的转基因牛提供坚实的基础。本发明通过脂质体转染法将外源性表达载体pSP-NRAMP1-HA导入牛成纤维细胞，经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因NRAMP1整合到牛成纤维细胞的基因组中；最后将整合有NRAMP1基因的牛成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。
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公开(公告)号：CN101928694A
公开(公告)日：2010-12-29
申请号：CN200910023046.4
申请日：2009-06-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明涉及一种人羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行分离纯化；3)将分离得到的羊水干细胞经过单克隆筛选和扩增培养，建立羊水干细胞系。本发明提供了一种快速、有效、安全、可实现人羊水干细胞体外长期扩增、可为组织工程研究提供新的种子细胞来源以及有望作为种子细胞进行临床应用的人羊水干细胞系的建立方法。
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公开(公告)号：CN106834224A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201611015207.1
申请日：2016-11-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/078 , C12N5/10 , C12N5/0735
CPC classification number: C12N5/0634 , C12N2501/11 , C12N2501/115 , C12N2501/155 , C12N2501/727 , C12N2506/02 , C12N2506/45
Abstract: 本发明属于血细胞的诱导分化领域，提供一种建立人多能干细胞诱导分化为成熟血细胞的方法，包括两大步骤：A. 人多能干细胞诱导分化为CD31、CD34的造血祖细胞；B. CD31、CD34的造血祖细胞诱导分化为人成熟血细胞。本发明提供的方法采用了单层细胞培养结合悬浮细胞培养的两步法诱导方式，简化了诱导程序，缩短了诱导时间，操作简单，具有高效、稳定的技术特点，采用无饲养层细胞的诱导分化体系，诱导得到的血细胞具备生物安全保障，能够满足临床转化和临床实验的要求，医学转化价值高。
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公开(公告)号：CN103923877B
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201410179808.0
申请日：2014-04-30
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 一种建立DOX调控的猪体细胞诱导重编程体系的方法，包括：1）猪胎儿成纤维细胞的原代分离培养；2）猪胎儿成纤维细胞重编程为第一代iPS；3）第一代iPS分化为猪第二代成纤维细胞；4）第二代成纤维细胞重编程为第二代iPS。本发明成功地建立了DOX诱导猪体细胞重编程体系，成功建立了四因子拷贝数一致的猪第一代iPS，获得了基因型一致的第二代成纤维细胞，成功使第二代成纤维细胞无需基因导入直接在DOX条件下就可以诱导形成第二代iPS；第二代成纤维重编程过程无需外源基因的重新导入，无需考虑病毒制备及感染效率，提高了实验的安全性；本发明为研究猪重编程机制及小分子化合物诱导重编程提供了新的资源。
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公开(公告)号：CN103923877A
公开(公告)日：2014-07-16
申请号：CN201410179808.0
申请日：2014-04-30
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 一种建立DOX调控的猪体细胞诱导重编程体系的方法，包括：1）猪胎儿成纤维细胞的原代分离培养；2）猪胎儿成纤维细胞重编程为第一代iPS；3）第一代iPS分化为猪第二代成纤维细胞；4）第二代成纤维细胞重编程为第二代iPS。本发明成功地建立了DOX诱导猪体细胞重编程体系，成功建立了四因子拷贝数一致的猪第一代iPS，获得了基因型一致的第二代成纤维细胞，成功使第二代成纤维细胞无需基因导入直接在DOX条件下就可以诱导形成第二代iPS；第二代成纤维重编程过程无需外源基因的重新导入，无需考虑病毒制备及感染效率，提高了实验的安全性；本发明为研究猪重编程机制及小分子化合物诱导重编程提供了新的资源。
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