公开(公告)号：CN107462713A

公开(公告)日：2017-12-12

申请号：CN201710540740.8

申请日：2017-07-05

Applicant: 浙江大学

Inventor： 沈立荣 ,  张一帆 ,  辛晓璇 ,  蒋晨旻 ,  王一然

IPC: G01N33/558 ,  G01N33/543

CPC classification number: G01N33/558 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种蜂蜜快速检测试纸条的制备方法及其试纸条与应用。制备方法包括（1）能够特异性识别MRJP1蛋白的多克隆抗体SP-1和SP-2的制备和纯化；（2）胶体金溶液的制备；（3）硝酸纤维素膜上包被质控线（C线）和检测线（T线）；（4）以蜜蜂内源性蛋白MRJP1为标志物的蜂蜜双抗体夹心快速检测试纸条的组装；（5）蜂蜜检测样品的准备。从蜂蜜样品中分离纯化的蛋白与该金标试纸条反应后，根据T线是否显色可以判别蜂蜜样品的真伪。本发明的蜂蜜双抗体金标试纸条适用于人造糖浆冒充的假蜂蜜的检测，为蜂蜜质量及掺假检测提供了一种非常可靠的快速检测新方法。

公开(公告)号：CN104316587A

公开(公告)日：2015-01-28

申请号：CN201410554252.9

申请日：2014-10-20

Applicant: 浙江大学 ,  杭州康力保健食品有限公司

Inventor： 沈立荣 ,  王一然 ,  翟量 ,  张旸 ,  葛虹良 ,  李玫璐 ,  于张颖

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种电泳胶蛋白条带灰度分析检测蜂王浆新鲜度的建立方法和应用。1）取新采集的新鲜蜂王浆加速老化，保温期间，每隔7天取出三管蜂王浆；2）对样品进行SDS-PAGE变性电泳，成像仪内扫描成图片；3）利用ImageJ软件对电泳胶每条泳道中的蛋白条带进行扫描，转换成显示各蛋白条带相应的峰，转换为灰度面积；4）以新鲜蜂王浆分子量为57kD的主蛋白1（MRJP1）条带的灰度面积为标准，计算出不同老化处理样品与新鲜蜂王浆MRJP1蛋白条带的灰度面积的相对比值，即新鲜度。本发明还提供了试剂盒等应用，为蜂王浆的新鲜度和掺杂检测提供了一种便捷检测方法，也为蜂产品质量监管部门、加工贸易企业蜂王浆、蜂蜜产品质量控制，新鲜度检测提供了非常方便和经济的技术手段。

公开(公告)号：CN103044549A

公开(公告)日：2013-04-17

申请号：CN201210573720.8

申请日：2012-12-26

Applicant: 浙江大学

Inventor： 沈立荣 ,  李玫璐 ,  王一然 ,  谭量量 ,  金凤 ,  丁美会 ,  陈正贤

IPC: C07K16/18 ,  C07K16/06 ,  C07K19/00 ,  C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种中华蜜蜂抗菌肽AccRoyalisin多克隆抗体的制备方法及用途。以大肠杆菌重组表达的中华蜜蜂王浆抗菌肽AccRoyalisin为抗原，免疫大白兔制备的多克隆抗体，该抗体效价大于40000倍；以此多克隆抗体为一抗，以重组表达的GST-AccRoyalisin为标准蛋白抗原作倍比稀释，用酶标仪通过Elisa法检测不同浓度GST-AccRoyalisin蛋白样品的吸光度，建立吸光度与MRJP1蛋白浓度的标准曲线。将不同蜂种或不同蜂群的血淋巴、蜂王浆冻干粉稀释后作为抗原，采用Elisa法检测得到样品的吸光度，代入所建立的标准曲线，计算得到样品的Royalisin的含量。本发明为Royalisin抗体提供了一种新的用途，为养蜂领域蜂中和蜂群抗病力的评价、抗病蜂群的选育，为蜂王浆防腐抗菌性能的评价提供了一种快捷的定性定量检测新方法。

公开(公告)号：CN105693858A

公开(公告)日：2016-06-22

申请号：CN201610146713.8

申请日：2016-03-15

Applicant: 浙江大学

Inventor： 沈立荣 ,  王一然 ,  谌迪 ,  张一帆 ,  沈苗宏 ,  辛晓璇

IPC: C07K16/18 ,  C07K16/06 ,  G01N33/68 ,  G01N33/543

CPC classification number: C07K16/18 ,  C07K16/06

Abstract: 本发明公开了一种针对蜂蜜中MRJP1抗体对的制备方法、检测方法及试剂盒。所述的MRJP1的特异性多肽M4的氨基酸序列为IKEALPHVPIFD，如SEQ ID NO：1所示；所述的MRJP1的特异性多肽M5的氨基酸序列为SGEYDYKNNYPSDID，如SEQ ID NO：2所示；然后免疫新西兰白兔。ELISA双抗夹心法，按以下步骤进行处理：包被捕获抗体SP-1，封闭，洗涤，加入抗原，加入酶标的检测抗体HRP-SP-2，洗涤，加显色底物，加显色终止液，用酶标仪测定样品的吸光值450 nm-630 nm。所述的抗原为待测蜂蜜或已知蜜源的纯蜂蜜，通过比较待测蜂蜜和已知蜜源的纯蜂蜜的MRJP1的吸光值判断待测蜂蜜的质量。本发明为蜂蜜质量及掺假量检测提供了一种可靠的快速检测新方法，可用于蜂产品质量监管部门、加工贸易企业蜂蜜产品质量控制。

公开(公告)号：CN103215329A

公开(公告)日：2013-07-24

申请号：CN201310080054.9

申请日：2013-03-13

Applicant: 浙江大学 ,  浙江康健生物技术有限公司

Inventor： 沈立荣 ,  王一然 ,  魏燕 ,  张燕 ,  胡夕姣 ,  黄良

IPC: C12P21/06

Abstract: 本发明涉及一种酶解湖羊胎盘制备羊胎素冻干粉的方法，湖羊胎盘经过清洗、切块破碎、制成匀浆、调节pH、加胰蛋白酶保温酶解、抽提、灭酶、过滤和冷冻干燥等步骤制得羊胎素冻干粉。通过以水解度为指标，作温度、酶浓度、pH值的单因素和正交试验分析，得到优化酶解的条件为：酶解温度35-55℃，pH7-11，酶浓度10-50U/g。在优化条件下，湖羊水解度为35.36%，羊胎素冻干粉产率为17.56%。经SDS-PAGE电泳检测，证明羊胎的主要大分子蛋白被降解成了小分子肽。本发明是首次采用湖羊胎盘生产羊胎素，为利用湖羊胎生产羊胎素保健食品、化妆品提供了可靠的科学依据与技术手段。