公开(公告)号：CN103059135A

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201210576152.7

申请日：2012-12-26

Applicant: 浙江大学

Inventor： 沈立荣 ,  柳丹丹 ,  于张颖 ,  肖发 ,  李玫璐 ,  张瑮文

IPC: C07K16/18 ,  C07K16/06 ,  G01N33/68 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种蜂王浆主蛋白MRJP1特异性抗体及其制备方法与Elisa定量检测。首先对意大利蜜蜂（Apismellifera）蜂王浆主蛋白MRJPs家族所有成员（MRJP1-MRJP9）的蛋白质氨基酸序列作同源性分析，选定MRJP1不同于其它MRJPs家族成员的特异性多肽的氨基酸序列。采用化学法合成相关特异性多肽，作为抗原，免疫新西兰白兔、取血清，Elisa检测得到效价较高的多克隆抗体R2，再用合成的MRJP1多肽制备的亲和柱纯化该抗体。以MRJP1为抗原Elisa法检测抗体R2的效价，该抗体的效价>1:20000。本发明为蜂王浆中MRJP1的定性定量检测提供了一种非常可靠的快速检测新方法，也为蜂产品质量监管部门、加工贸易企业蜂王浆、蜂蜜产品质量控制，新鲜度检测、真假产品鉴别提供了非常可靠的技术手段。

公开(公告)号：CN104316587A

公开(公告)日：2015-01-28

申请号：CN201410554252.9

申请日：2014-10-20

Applicant: 浙江大学 ,  杭州康力保健食品有限公司

Inventor： 沈立荣 ,  王一然 ,  翟量 ,  张旸 ,  葛虹良 ,  李玫璐 ,  于张颖

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种电泳胶蛋白条带灰度分析检测蜂王浆新鲜度的建立方法和应用。1）取新采集的新鲜蜂王浆加速老化，保温期间，每隔7天取出三管蜂王浆；2）对样品进行SDS-PAGE变性电泳，成像仪内扫描成图片；3）利用ImageJ软件对电泳胶每条泳道中的蛋白条带进行扫描，转换成显示各蛋白条带相应的峰，转换为灰度面积；4）以新鲜蜂王浆分子量为57kD的主蛋白1（MRJP1）条带的灰度面积为标准，计算出不同老化处理样品与新鲜蜂王浆MRJP1蛋白条带的灰度面积的相对比值，即新鲜度。本发明还提供了试剂盒等应用，为蜂王浆的新鲜度和掺杂检测提供了一种便捷检测方法，也为蜂产品质量监管部门、加工贸易企业蜂王浆、蜂蜜产品质量控制，新鲜度检测提供了非常方便和经济的技术手段。

公开(公告)号：CN103059135B

公开(公告)日：2014-07-30

申请号：CN201210576152.7

申请日：2012-12-26

Applicant: 浙江大学

Inventor： 沈立荣 ,  柳丹丹 ,  于张颖 ,  肖发 ,  李玫璐 ,  张瑮文

IPC: C07K16/18

Abstract: 本发明公开了一种蜂王浆主蛋白MRJP1特异性抗体及其制备方法与Elisa定量检测。首先对意大利蜜蜂（Apismellifera）蜂王浆主蛋白MRJPs家族所有成员（MRJP1-MRJP9）的蛋白质氨基酸序列作同源性分析，选定MRJP1不同于其它MRJPs家族成员的特异性多肽的氨基酸序列。采用化学法合成相关特异性多肽，作为抗原，免疫新西兰白兔、取血清，Elisa检测得到效价较高的多克隆抗体R2，再用合成的MRJP1多肽制备的亲和柱纯化该抗体。以MRJP1为抗原Elisa法检测抗体R2的效价，该抗体的效价>1:20000。本发明为蜂王浆中MRJP1的定性定量检测提供了一种非常可靠的快速检测新方法，也为蜂产品质量监管部门、加工贸易企业蜂王浆、蜂蜜产品质量控制，新鲜度检测、真假产品鉴别提供了非常可靠的技术手段。

公开(公告)号：CN103772497A

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：CN201410013192.X

申请日：2014-01-10

Applicant: 浙江大学 ,  杭州碧于天保健品有限公司

Inventor： 沈立荣 ,  李玫璐 ,  于张颖 ,  周志军 ,  谭量量 ,  赵敏洁 ,  尹志红 ,  裘卫

IPC: C07K14/435 ,  C07K1/34 ,  A23L2/38

CPC classification number: C07K14/43572 ,  A23L2/38 ,  A23L2/74 ,  A23L21/20 ,  A23V2002/00 ,  A23V2250/542

Abstract: 本发明公开了蜂王浆中得到王浆主蛋白和活性滤后液的超滤膜分离方法。称取蜂王浆，与水在4℃下搅拌混匀，用NaOH调节pH，用NaCl调节离子强度，再用0.2μm的微孔滤膜去除微粒；采用截留分子量为100kDa的超滤膜M1分离去除大分子杂质，再用截留分子量为49kDa的超滤膜M2分离和浓缩M1透过液中的王浆主蛋白，当浓缩至1/3体积时，补充纯水，让小分子溶液透过M2，得到的截流液为纯化和浓缩的王浆主蛋白溶液，经冷冻干燥成为王浆主蛋白冻干粉。小分子溶液含有多糖和10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)，可用于功能饮料生产。本发明首次用超滤装置对王浆主蛋白（MRJPs）进行分离浓缩，MRJPs的提取率达到82.63%，经冷冻干燥成为蛋白含量大于70%的冻干粉；滤后液用于制备饮料，实现王浆的综合利用。

公开(公告)号：CN103772497B

公开(公告)日：2016-01-13

申请号：CN201410013192.X

申请日：2014-01-10

Applicant: 浙江大学 ,  杭州碧于天保健品有限公司

Inventor： 沈立荣 ,  李玫璐 ,  于张颖 ,  周志军 ,  谭量量 ,  赵敏洁 ,  尹志红 ,  裘卫

IPC: C07K14/435 ,  C07K1/34 ,  A23L2/38

Abstract: 本发明公开了蜂王浆中得到王浆主蛋白和活性滤后液的超滤膜分离方法。称取蜂王浆，与水在4℃下搅拌混匀，用NaOH调节pH，用NaCl调节离子强度，再用0.2μm的微孔滤膜去除微粒；采用截留分子量为100kDa的超滤膜M1分离去除大分子杂质，再用截留分子量为49kDa的超滤膜M2分离和浓缩M1透过液中的王浆主蛋白，当浓缩至1/3体积时，补充纯水，让小分子溶液透过M2，得到的截流液为纯化和浓缩的王浆主蛋白溶液，经冷冻干燥成为王浆主蛋白冻干粉。小分子溶液含有多糖和10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)，可用于功能饮料生产。本发明首次用超滤装置对王浆主蛋白（MRJPs）进行分离浓缩，MRJPs的提取率达到82.63%，经冷冻干燥成为蛋白含量大于70%的冻干粉；滤后液用于制备饮料，实现王浆的综合利用。

公开(公告)号：CN103044549A

公开(公告)日：2013-04-17

申请号：CN201210573720.8

申请日：2012-12-26

Applicant: 浙江大学

Inventor： 沈立荣 ,  李玫璐 ,  王一然 ,  谭量量 ,  金凤 ,  丁美会 ,  陈正贤

IPC: C07K16/18 ,  C07K16/06 ,  C07K19/00 ,  C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种中华蜜蜂抗菌肽AccRoyalisin多克隆抗体的制备方法及用途。以大肠杆菌重组表达的中华蜜蜂王浆抗菌肽AccRoyalisin为抗原，免疫大白兔制备的多克隆抗体，该抗体效价大于40000倍；以此多克隆抗体为一抗，以重组表达的GST-AccRoyalisin为标准蛋白抗原作倍比稀释，用酶标仪通过Elisa法检测不同浓度GST-AccRoyalisin蛋白样品的吸光度，建立吸光度与MRJP1蛋白浓度的标准曲线。将不同蜂种或不同蜂群的血淋巴、蜂王浆冻干粉稀释后作为抗原，采用Elisa法检测得到样品的吸光度，代入所建立的标准曲线，计算得到样品的Royalisin的含量。本发明为Royalisin抗体提供了一种新的用途，为养蜂领域蜂中和蜂群抗病力的评价、抗病蜂群的选育，为蜂王浆防腐抗菌性能的评价提供了一种快捷的定性定量检测新方法。