一种游离DNA甲基化建库的方法
    10.
    发明公开

    公开(公告)号:CN115354067A

    公开(公告)日:2022-11-18

    申请号:CN202210041455.2

    申请日:2022-01-14

    IPC分类号: C12Q1/6806 C40B50/06 C12Q1/34

    摘要: 本发明提供一种游离DNA甲基化建库的方法,有效的解决了甲基化双链建库在使用中成本较高、检测灵敏度低、冗余度高的问题;包括步骤:S1:提供样本DNA,使用TET酶对样本DNA中的5mC和5fmC进行氧化,分别转化为5caC/5gC,完成氧化并加入终止反应液,然后进行磁珠纯化;S2:将纯化产物变性为单链DNA,使用APOBEC酶,将未修饰的胞嘧啶转化形成尿嘧啶,然后进行磁珠纯化,得到完成C到U转化的单链DNA模板;S3:对纯化产物进行修复,使用单链连接酶进行第一接头连接,得到3’端连接有接头的产物单链DNA分子;一种游离DNA甲基化建库的方法,由于酶法甲基化转化条件温和,可最大程度的减少DNA在转化过程中的损失,提高了文库建库效率。