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公开(公告)号：CN116376979A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310353553.4
申请日：2023-04-04
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9编辑技术的敲除鸡柯萨奇腺病毒受体CAR基因的细胞系的构建方法，包括以下步骤：步骤1)、设计一种特异性靶向鸡CAR基因的sgRNA；步骤2)、构建一种用于靶向敲除鸡CAR基因的CRISPR‑Cas9系统，CRISPR‑Cas9系统中含有Cas9蛋白和上述特异性靶向鸡CAR基因的sgRNA，或者含有携带编码Cas9蛋白的编码序列和编码sgRNA的编码序列；CRISPR‑Cas9系统中，Cas9蛋白基因和sgRNA序列位于同一载体上，所述载体为lentiCRISPR v2；步骤3)、将lentiCRISPR v2质粒转染到细胞中，利用CRISPR‑Cas9系统编辑实现CAR基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源CAR敲除的细胞系。本发明为探究CAR生物学功能与解析CAR基因在FAdV‑8b的感染中的作用打下了基础，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN115980344A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210805714.4
申请日：2022-07-08
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/58 , C07K14/08 , C12N15/866 , C12N15/40 , C07K1/22
Abstract: 本发明涉及一种基于昆虫细胞表达产物的检测新型鹅星状病毒抗体的ELISA试剂盒，本发明的原理是将表达新型GAstV的ORF2重组蛋白的杆状病毒感染Sf9细胞，并以镍柱亲和层析法纯化感染细胞裂解液上清中的ORF2重组蛋白，将纯化的重组蛋白分别作为包被抗原组装检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒。研究结果表明，建立的检测新型GAstV抗体的间接ELISA试剂盒具有良好的特异性和灵敏性，在新型GAstV病毒流行病学调查中具有良好的应用价值。
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公开(公告)号：CN114457115A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210220996.1
申请日：2022-03-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/40 , C12N7/01
Abstract: 本发明涉及一种表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建GAstV‑ORF2基因重组杆状病毒表达载体：（2）表达重组GAstV‑ORF2蛋白的杆状病毒包装和传代：（3）将携带有GAstV‑ORF2基因的杆状病毒质粒转染进Sf9细胞，并在27℃无CO2培养箱中培养5‑7天，每天观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞上清，放入‑80℃保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒保存并扩大培养，得到表达新型鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2的重组杆状病毒。本发明的原理是通过扩增鹅星状病毒衣壳蛋白ORF2全长片段，构建杆状病毒重组载体，转染Sf9细胞，获得能够表达衣壳蛋白ORF2的杆状病毒。
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公开(公告)号：CN115840044A
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202211251264.5
申请日：2022-10-13
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/68 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉一种检测新型鹅星状病毒ORF2蛋白抗体的特异性多肽‑ELISA试剂盒及其方法，所述试剂盒包含包被GAstV独有特异性多肽的酶标板、阳性阴性对照、HRP标记的兔抗鸡二抗、样品稀释液、洗涤液、显色液以及终止液；所述包被的GAstV独有特异性多肽是根据GAstV线性B细胞抗原表位序列设计合成，具体的序列如下：CQTLTDPEEDDDPLSDVTSLFD。通过本发明，可以实现快速特异检测GAstV抗体。此试剂盒能用于大规模血清学检测和流行病学调查，在GAstV感染以及免疫检测中具有良好的应用和推广价值。
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公开(公告)号：CN109295010A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM-F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于-80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF-1细胞和BHK-21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105779649A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610186635.4
申请日：2016-03-29
Applicant: 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
CPC classification number: C12Q1/702 , C12Q1/6804 , C12Q2531/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒。所述试剂盒包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、Fast Master混合液和Universal qPCR反应液。本发明利用生物素标记的抗禽白血病病毒特异性抗体以及商品化邻位连接试剂，通过免疫PCR检测样品中禽白血病病毒抗原。实现不用对样品进行繁琐的核酸提取过程，通过PCR方法对禽白血病病毒抗原进行快速高通量检测。这一检测禽白血病病毒免疫PCR试剂盒将应用于禽白血病病毒临床检测与净化中，将填补国内外相关技术空白。
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公开(公告)号：CN100510082C
公开(公告)日：2009-07-08
申请号：CN200710024386.X
申请日：2007-06-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/33
Abstract: 一种淋巴组织特异性基因表达调控序列及其构建方法，本发明涉及基因表达调控和基因工程领域，提供了用于淋巴细胞中特异性高表达的基因调控DNA序列。具有马立克氏病病毒编码的vIL8基因淋巴组织特异性基因表达正调控的启动子-470-+10的DNA序列。人们可用该基因序列构建相应的表达载体，驱动目的基因在靶器官组织中的特异性表达，用这些调控DNA序列在特定组织，调控一些抑制肿瘤的基因，包括有调理作用或诱导凋亡、抑制细胞生长信号传导，从而达到抑制、消灭肿瘤的目的，用这些调控DNA序列进行免疫增强和调节的药物研究与开发。
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公开(公告)号：CN112881688A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110321454.9
申请日：2021-03-25
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/533 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种快速检测鹅星状病毒的免疫荧光方法，利用鸡肝细胞对鹅星状病毒感染的组织样品或者已经分离到的病毒进行培养，培养基为含1μg/mL TPCK‑胰蛋白酶的DMEM‑F12培养基，用针对鹅星状病毒P2蛋白的6C6单抗作为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗进行IFA检测；或者直接取新鲜的组织进行冰冻切片，用针对鹅星状病毒P2蛋白的6C6单抗作为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗进行IFA检测。所述一抗是杂交瘤细胞株6C6分泌的抗星状病毒P2蛋白单克隆抗体6C6制备而成。通过本发明，本发明的快速检测鹅星状病毒的免疫荧光技术可以特异性的检测鹅星状病毒，且阴性背景低，效果显著。
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公开(公告)号：CN112852756A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110321451.5
申请日：2021-03-25
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法，包括以下步骤：（1）利用鸡肝细胞对鹅星状病毒进行培养；（2）鸡肝细胞快速扩增鹅星状病毒，利用鸡肝细胞对鹅星状病毒进行培养扩增的培养基为含1μg/mL TPCK‑胰蛋白酶的DMEM‑F12培养基；（3）鸡肝细胞能扩增鹅星状病毒，第三天病毒效价可达1.08×106TCID50/ml。通过本发明，这种快速分离扩增方法的建立为快速病毒检测和疫苗的研制提供技术平台，节约时间、成本。因此，本发明在GAstV的病毒检测及疫苗研制中具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN101100670A
公开(公告)日：2008-01-09
申请号：CN200710024386.X
申请日：2007-06-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/33
Abstract: 一种淋巴组织特异性基因表达调控序列及其构建方法，本发明涉及基因表达调控和基因工程领域，提供了用于淋巴细胞中特异性高表达的基因调控DNA序列。具有马立克氏病病毒编码的vIL8基因淋巴组织特异性基因表达正调控的启动子-470-+10的DNA序列。人们可用该基因序列构建相应的表达载体，驱动目的基因在靶器官组织中的特异性表达，用这些调控DNA序列在特定组织，调控一些抑制肿瘤的基因，包括有调理作用或诱导凋亡、抑制细胞生长信号传导，从而达到抑制、消灭肿瘤的目的，用这些调控DNA序列进行免疫增强和调节的药物研究与开发。
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