公开(公告)号：CN101126088B

公开(公告)日：2011-08-03

申请号：CN200710044022.8

申请日：2007-07-19

Applicant: 复旦大学

Inventor： 宋大新 ,  赵志安 ,  张彦 ,  钟江

IPC: C12N15/12 ,  C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种重组人载脂蛋白Al米兰突变体(rAIM)在毕赤酵母中分泌表达的方法。将突变后的apoAI—milano cDNA插入表达质粒pPIC9k，电击导入毕赤酵母GS115，通过对摇瓶培养基和培养条件的优化，发酵上清液中有明显的rAIM表达，其分子量与人血浆中提取的ApoAI相同。纯化后的rAIM具有磷脂结合活性。

公开(公告)号：CN101126088A

公开(公告)日：2008-02-20

申请号：CN200710044022.8

申请日：2007-07-19

Applicant: 复旦大学

Inventor： 宋大新 ,  赵志安 ,  张彦 ,  钟江

IPC: C12N15/12 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种重组人载脂蛋白AI米兰突变体(rAIM)在毕赤酵母中分泌表达的方法。将突变后的apoAI－milano cDNA插入表达质粒pPIC9k，电击导入毕赤酵母GS115，通过对摇瓶培养基和培养条件的优化，发酵上清液中有明显的rAIM表达，其分子量与人血浆中提取的ApoAI相同。纯化后的rAIM具有磷脂结合活性。

公开(公告)号：CN1637145A

公开(公告)日：2005-07-13

申请号：CN200410089315.4

申请日：2004-12-09

Applicant: 复旦大学

Inventor： 宋大新 ,  赵志安 ,  杨婷婷 ,  张淼 ,  张彦

IPC: C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N15/87 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明属生物工程技术领域，具体为一种人载脂蛋白ApoA I在毕赤氏酵母胞内表达的方法。它将人工合成的apoA I基因插入胞内表达质粒pPIC3.5k，电击导入毕赤氏酵母菌株GS115，经摇瓶发酵和甲醇诱导，在酵母细胞内有明显的rApoA I蛋白表达，其分子质量与人血浆中提取的ApoA I相同。

公开(公告)号：CN1594582A

公开(公告)日：2005-03-16

申请号：CN200410025581.0

申请日：2004-06-30

Applicant: 复旦大学

Inventor： 吴满平 ,  宋大新 ,  周佩 ,  钟江 ,  赵志安

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P21/02 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种制备人载脂蛋白A－I(ApoA－I)的方法。具体涉及利用毕赤酵母系统，通过构建重组工程菌株、表达、分离纯化获得高效生产人载脂蛋白A－I的方法。本发明通过基因工程手段将来源于天然的apoA－I基因重组至P.pastoris宿主菌，表达水平可高达200mg/L，表达产物经冷丙酮分级沉淀和－Sepharose分离纯化获得电泳纯的ApoA－I蛋白。经Western－blot鉴定、蛋白质谱检测、N端氨基酸测序、细胞结合活性测定均与人血来源的ApoA－I蛋白一致。

公开(公告)号：CN1603415A

公开(公告)日：2005-04-06

申请号：CN200410067343.6

申请日：2004-10-21

Applicant: 复旦大学

Inventor： 宋大新 ,  赵志安 ,  王洪海 ,  刘林

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/31 ,  C12N15/21 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种结核分枝杆菌ESAT－6蛋白在毕赤氏酵母中的融合表达方法。它将esat－6基因和人α－2a干扰素基因串联起来，两者间的linker为人肠激酶识别序列，将重组融合基因的DNA片段插入表达载体p PIC9K，电击导入毕赤氏酵母菌株SMD1168中，实现ESAT－6融合蛋白的高效分泌表达。经疏水层析和离子交换获得纯的ESAT－6蛋白。

公开(公告)号：CN1320119C

公开(公告)日：2007-06-06

申请号：CN200410089315.4

申请日：2004-12-09

Applicant: 复旦大学

Inventor： 宋大新 ,  赵志安 ,  杨婷婷 ,  张淼 ,  张彦

IPC: C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N15/87 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明属生物工程技术领域，具体为一种人载脂蛋白ApoA I在毕赤氏酵母胞内表达的方法。它将人工合成的apoA I基因插入胞内表达质粒pPIC3.5k，电击导入毕赤氏酵母菌株GS115，经摇瓶发酵和甲醇诱导，在酵母细胞内有明显的rApoA I蛋白表达，其分子质量与人血浆中提取的ApoA I相同。

公开(公告)号：CN1274835C

公开(公告)日：2006-09-13

申请号：CN200410067343.6

申请日：2004-10-21

Applicant: 复旦大学

Inventor： 宋大新 ,  赵志安 ,  王洪海 ,  刘林

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/31 ,  C12N15/21 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体为一种结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤氏酵母中的融合表达方法。它将esat-6基因和人α-2a干扰素基因串联起来，两者间的linker为人肠激酶识别序列，将重组融合基因的DNA片段插入表达载体p PIC9K，电击导入毕赤氏酵母菌株SMD1168中，实现ESAT-6融合蛋白的高效分泌表达。经疏水层析和离子交换获得纯的ESAT-6蛋白。