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公开(公告)号：CN108148807B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201611097574.0
申请日：2016-12-03
申请人： 同济大学 , 上海捷易生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/0797
摘要： 本发明涉及一种生长因子诱导生成神经前体细胞的方法。它是步骤是：A通过向基础培养基中添加特定生长因子，来调控细胞上下游的信号通路，细胞因子使用包括：LIF(白血病抑制因子)、B27(不含维他命A)、肝素、FGF‑2和EGF，通过这些因子的组合，可以将哺乳动物体细胞去分化到部分重编程状态；B接着采用神经类细胞维持传代的生长因子N2、B27(含维他命A)、FGF2、EGF等将这种部分重编程状态的细胞继续分化为功能性的神经前体细胞；C将诱导获得的神经前体细胞在神经干细胞培养基中进一步培养，可进行扩增和保存。本发明的方法一方面规避了传统病毒介导的诱导方法的外源基因插入，免疫原性；又通过使用生长因子降低了潜在的致瘤性；另一方面，又极大改善了已有的小分子化合物诱导方法中存在的效率偏低的问题。
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公开(公告)号：CN108148808B
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN201611101061.2
申请日：2016-12-05
申请人： 同济大学 , 上海捷易生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/0797
摘要： 本发明涉及一种有助于诱导生成神经前体细胞的诱导培养基。其成份和含量是：87％DMEM/F12培养基(Gibco)，1％GlutaMAX(Gibco)，2％B27 minus vitamin A(Gibco)，1～10μg/mL heparin(Stem Cell Technologies)，1000units/mL LIF(mLIF或hLIF)(Merck Millipore)，10～20ng/mL basic fibroblast growth factor(bFGF；R&D Systems)，10～40ng/mL epidermal growth factor(EGF；Peprotech)。该培养基中包含谱系特异性细胞因子，以一定浓度进行组合。通过该诱导培养基，可以在体外环境下，将哺乳动物体细胞诱导形成有功能的神经前体细胞。
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公开(公告)号：CN108148807A
公开(公告)日：2018-06-12
申请号：CN201611097574.0
申请日：2016-12-03
申请人： 同济大学 , 上海捷易生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/0797
CPC分类号： C12N5/0618 , C12N2501/11 , C12N2501/115 , C12N2501/235 , C12N2501/91
摘要： 本发明涉及一种生长因子诱导生成神经前体细胞的方法。它是步骤是：A通过向基础培养基中添加特定生长因子，来调控细胞上下游的信号通路，细胞因子使用包括：LIF(白血病抑制因子)、B27(不含维他命A)、肝素、FGF-2和EGF，通过这些因子的组合，可以将哺乳动物体细胞去分化到部分重编程状态；B接着采用神经类细胞维持传代的生长因子N2、B27(含维他命A)、FGF2、EGF等将这种部分重编程状态的细胞继续分化为功能性的神经前体细胞；C将诱导获得的神经前体细胞在神经干细胞培养基中进一步培养，可进行扩增和保存。本发明的方法一方面规避了传统病毒介导的诱导方法的外源基因插入，免疫原性；又通过使用生长因子降低了潜在的致瘤性；另一方面，又极大改善了已有的小分子化合物诱导方法中存在的效率偏低的问题。
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公开(公告)号：CN108148808A
公开(公告)日：2018-06-12
申请号：CN201611101061.2
申请日：2016-12-05
申请人： 同济大学 , 上海捷易生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/0797
CPC分类号： C12N5/0623 , C12N2500/38 , C12N2501/11 , C12N2501/115 , C12N2501/20 , C12N2501/998 , C12N2506/02 , C12N2506/1307
摘要： 本发明涉及一种有助于诱导生成神经前体细胞的诱导培养基。其成份和含量是：87％DMEM/F12培养基(Gibco)，1％GlutaMAX(Gibco)，2％B27 minus vitamin A(Gibco)，1～10μg/mL heparin(Stem Cell Technologies)，1000units/mL LIF(mLIF或hLIF)(Merck Millipore)，10～20ng/mL basic fibroblast growth factor(bFGF；R&D Systems)，10～40ng/mL epidermal growth factor(EGF；Peprotech)。该培养基中包含谱系特异性细胞因子，以一定浓度进行组合。通过该诱导培养基，可以在体外环境下，将哺乳动物体细胞诱导形成有功能的神经前体细胞。
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公开(公告)号：CN106987629A
公开(公告)日：2017-07-28
申请号：CN201710206067.4
申请日：2017-03-31
申请人： 上海市第一妇婴保健院 , 上海捷易生物科技有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种在单细胞水平上检测基因组上核小体排布的方法，包括如下步骤：(1)裂解细胞，并用微球核酸酶处理基因组上的DNA片段；(2)将步骤(1)中酶切后的产物用蛋白酶处理，去掉DNA片段缠绕的组蛋白；(3)将步骤(2)中得到的DNA片段进行测序文库构建，并进行高通量测序；(4)对高通量测序的结果进行比对分析，并对测序结果的质量进行评估，包括在基因组上的覆盖度、片段长度分布、在转录起始位点和CTCF结合位点的核小体排布。本发明方法通过尽量减少DNA纯化次数来减少损失，提高文库构建效率，进而可以利用极少量的细胞甚至单个细胞在全基因组水平上检测细胞的核小体排布。
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公开(公告)号：CN106987629B
公开(公告)日：2021-01-15
申请号：CN201710206067.4
申请日：2017-03-31
申请人： 上海市第一妇婴保健院 , 上海捷易生物科技有限公司
IPC分类号： C12Q1/6869
摘要： 本发明涉及一种在单细胞水平上检测基因组上核小体排布的方法，包括如下步骤：(1)裂解细胞，并用微球核酸酶处理基因组上的DNA片段；(2)将步骤(1)中酶切后的产物用蛋白酶处理，去掉DNA片段缠绕的组蛋白；(3)将步骤(2)中得到的DNA片段进行测序文库构建，并进行高通量测序；(4)对高通量测序的结果进行比对分析，并对测序结果的质量进行评估，包括在基因组上的覆盖度、片段长度分布、在转录起始位点和CTCF结合位点的核小体排布。本发明方法通过尽量减少DNA纯化次数来减少损失，提高文库构建效率，进而可以利用极少量的细胞甚至单个细胞在全基因组水平上检测细胞的核小体排布。
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公开(公告)号：CN111088290B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201911398922.1
申请日：2019-12-30
申请人： 同济大学
IPC分类号： C12N15/90 , C12N15/85 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种杜鹃素在基因编辑中的应用。所述杜鹃素能够靶向促进DNA双链断裂中同源重组修复(Homologous recombination,HR)效率但对非同源末端连接修复(Non‑homologous end joint,NHEJ)效率没有影响，进而为基因编辑中提高目的片段靶向整合效率提供更加便捷的依据。与当前多种小分子化合物在基因编辑中促进同源重组打靶的方式相比，本发明涉及的小分子化合物能够更有效及稳定地在基因编辑中实现靶向整合目的，在不同类型细胞以及小鼠胚胎水平均能够适用，其促进靶向整合效率最高达3倍。同时本发明所应用的筛选系统也更为简便有效，为多种天然小分子化合物在DNA双链断裂修复方面提供了合理的筛选方式。
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公开(公告)号：CN115501222A
公开(公告)日：2022-12-23
申请号：CN202211164826.2
申请日：2022-09-23
申请人： 同济大学
IPC分类号： A61K31/352 , A61P15/08 , C12N5/073
摘要： 本发明涉及一种杜鹃素促进体细胞核移植效率的应用及方法。本发明中，杜鹃素用于制备提高体细胞核移植胚胎发育率和出生率的药物的应用，与当前多种小分子化合物在促进的体细胞核移植胚胎发育效率方式相比，本发明涉及的原理与以往通过调控体细胞核移植过程中表观遗传学差异的方法不同，小分子化合物杜鹃素能够有效促进体细胞核移植胚胎的基因组稳定性，并显著提高胚胎发育率和出生率，因而存在与其他药物联用达到更好效果的可能性。同时本发明所建立的筛选流程也更为有效，为探究小分子化合物靶点提供了合理的筛选方式。
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公开(公告)号：CN115501222B
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202211164826.2
申请日：2022-09-23
申请人： 同济大学
IPC分类号： A61K31/352 , A61P15/08 , C12N5/073
摘要： 本发明涉及一种杜鹃素促进体细胞核移植效率的应用及方法。本发明中，杜鹃素用于制备提高体细胞核移植胚胎发育率和出生率的药物的应用，与当前多种小分子化合物在促进的体细胞核移植胚胎发育效率方式相比，本发明涉及的原理与以往通过调控体细胞核移植过程中表观遗传学差异的方法不同，小分子化合物杜鹃素能够有效促进体细胞核移植胚胎的基因组稳定性，并显著提高胚胎发育率和出生率，因而存在与其他药物联用达到更好效果的可能性。同时本发明所建立的筛选流程也更为有效，为探究小分子化合物靶点提供了合理的筛选方式。
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公开(公告)号：CN111088290A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911398922.1
申请日：2019-12-30
申请人： 同济大学
IPC分类号： C12N15/90 , C12N15/85 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种杜鹃素在基因编辑中的应用。所述杜鹃素能够靶向促进DNA双链断裂中同源重组修复(Homologous recombination,HR)效率但对非同源末端连接修复(Non-homologous end joint,NHEJ)效率没有影响，进而为基因编辑中提高目的片段靶向整合效率提供更加便捷的依据。与当前多种小分子化合物在基因编辑中促进同源重组打靶的方式相比，本发明涉及的小分子化合物能够更有效及稳定地在基因编辑中实现靶向整合目的，在不同类型细胞以及小鼠胚胎水平均能够适用，其促进靶向整合效率最高达3倍。同时本发明所应用的筛选系统也更为简便有效，为多种天然小分子化合物在DNA双链断裂修复方面提供了合理的筛选方式。
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