公开(公告)号：CN116640722A

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202310563005.4

申请日：2023-05-18

Applicant: 南京师范大学

Inventor： 暨杰 ,  周杰 ,  林舸 ,  宗永钦 ,  张凯 ,  宁先会 ,  王涛 ,  尹绍武

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/077

Abstract: 本发明公开了一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，该方法包括以下步骤：(1)选取健康的黄颡鱼，取样前饥饿24小时；(2)对黄颡鱼进行静脉取血，所得血液静置至析出血清，将血清离心过滤后冻存备用；(3)对静脉取血后的黄颡鱼进行解剖，将获得的头肾组织进行消化；(4)制备完全培养液；(5)细胞原代培养；(6)细胞传代培养。本发明培养方法简单，材料易获取，成功培养了黄颡鱼的头肾细胞，传代后细胞呈成纤维样；本发明利用黄颡鱼同源血清，首次在体外成功培养了连续传代的黄颡鱼头肾细胞，细胞形态好、存活时间长，可以大量提供黄颡鱼头肾细胞，可应用于黄颡鱼免疫和病害基因功能等方面的研究。

公开(公告)号：CN114774349B

公开(公告)日：2024-06-25

申请号：CN202210360986.8

申请日：2022-04-07

Applicant: 南京师范大学

Inventor： 暨杰 ,  林舸 ,  周杰 ,  宗永钦 ,  张凯 ,  宁先会 ,  王涛 ,  尹绍武

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明公开了一种暗纹东方鲀原代肾细胞贴壁培养方法，包括以下步骤：（1）选取体型适中且健康的暗纹东方鲀稚鱼，对鱼体进行消毒后，无菌操作解剖取得肾脏组织；（2）在含青霉素‑链霉素双抗溶液的培养液中清洗，剪碎，在含EDTA的胰蛋白酶中37℃消化，消化后收集到灭菌离心管中，离心后得到肾细胞沉淀；（3）向细胞沉淀中加入适量预温的含暗纹东方鲀血清的完全培养液，得到重悬浮的细胞悬液，转入多聚赖氨酸预处理的细胞培养瓶中培养；本发明首次成功培养出暗纹东方鲀原代肾细胞，所构建的肾细胞原代培养方法简单，培养所需材料易获取，细胞贴壁时间短，生长形态良好，为暗纹东方鲀新品种选育、病害防控、免疫基因功能等研究提供细胞水平材料。

公开(公告)号：CN114774349A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210360986.8

申请日：2022-04-07

Applicant: 南京师范大学

Inventor： 暨杰 ,  林舸 ,  周杰 ,  宗永钦 ,  张凯 ,  宁先会 ,  王涛 ,  尹绍武

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明公开了一种暗纹东方鲀原代肾细胞贴壁培养方法，包括以下步骤：（1）选取体型适中且健康的暗纹东方鲀稚鱼，对鱼体进行消毒后，无菌操作解剖取得肾脏组织；（2）在含青霉素‑链霉素双抗溶液的培养液中清洗，剪碎，在含EDTA的胰蛋白酶中37℃消化，消化后收集到灭菌离心管中，离心后得到肾细胞沉淀；（3）向细胞沉淀中加入适量预温的含暗纹东方鲀血清的完全培养液，得到重悬浮的细胞悬液，转入多聚赖氨酸预处理的细胞培养瓶中培养；本发明首次成功培养出暗纹东方鲀原代肾细胞，所构建的肾细胞原代培养方法简单，培养所需材料易获取，细胞贴壁时间短，生长形态良好，为暗纹东方鲀新品种选育、病害防控、免疫基因功能等研究提供细胞水平材料。