公开(公告)号：CN116413321A

公开(公告)日：2023-07-11

申请号：CN202111680190.2

申请日：2021-12-31

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  鲁健杨 ,  韩祎巍 ,  王明慧 ,  张怡晨

IPC: G01N27/327

Abstract: 本发明首次实现了COF的DNA功能化，并以此为基础构建了一种电化学探针以用于外泌体的检测，为COF在生物传感中的应用提供了一种新思路。本发明设计了一种负载用信号分子并具有靶向能力的COF探针，将得到的COF复合物进一步互补上胆固醇标记的DNA，以赋予其靶向外泌体的能力。基于得到的COF探针，我们研发了一种三明治型的电化学探针，用于外泌体的灵敏检测。传感器的性能被进行了优化和评估，展现出了优异的检测能力。本章的工作首次合成了负载有小分子货物的DNA功能化COF纳米颗粒，并且验证了其作为电化学探针的能力。本工作将进一步促进COF这一新型纳米材料在生物医学领域的应用。

公开(公告)号：CN114181998A

公开(公告)日：2022-03-15

申请号：CN202010963827.8

申请日：2020-09-14

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  杨洁 ,  潘艳红 ,  王磊 ,  邓颖 ,  王明慧 ,  彭英

IPC: C12Q1/682

Abstract: 本发明公开了分析化学领域内一种空间位阻控制信号放大且简单灵敏的外泌体检测方法。外泌体是一种新兴的癌症生物标志物，开发简单、方便和灵敏的外泌体检测技术得到了广泛的关注。我们提出利用外泌体的位阻效应阻碍双链DNA的互补配对过程，因而链霉亲和素修饰的DNA单链能够在末端脱氧核苷酸转移酶的作用下延伸出大量G四联体，并与硫黄素T结合产生强烈荧光，从而开发了一种基于空间位阻控制信号放大且简单灵敏的新型外泌体检测方法。该方法能够在一定浓度范围内实现外泌体的定量分析且检测限较低，同时在含有10％人血清的复杂环境中依然能够保持良好的检测效果，显示该方法在临床检测方面具有一定的潜力。

公开(公告)号：CN105911289B

公开(公告)日：2018-04-10

申请号：CN201610225995.0

申请日：2016-04-13

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  李超 ,  马洁桦 ,  胡晓璐

IPC: C12Q1/527

Abstract: 本发明属于生物电化学技术领域，具体涉及一种基于动态三明治结构的电化学传感器及其制备和应用。本发明所述电化学生物传感器，由电极、信号链和反应体系组成，电极采用金电极，信号链为一段单链DNA，DNA链的5’端修饰有巯基，DNA链的3’端修饰有亚甲基蓝，通过巯基与金电极表面自组装形成金‑巯键立于金电极表面，反应体系中含有DNAzyme与必须的反应缓冲体系，DNAzyme可以与信号链互补配对并将其切割成两段DNA短链，DNAzyme上标记有靶蛋白识别元件，可用于定量检测蛋白质或蛋白质间相互作用，本发明操作简单，操作者无需特别训练，适合于偏远地区及资源贫乏地区使用。

公开(公告)号：CN117871858A

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202210880905.7

申请日：2022-07-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  鲁健杨 ,  韩祎巍 ,  张怡晨 ,  王开智

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/543 ,  G01N21/78

Abstract: 在本发明中，我们制备了多肽功能化修饰的COFs，并且用其负载酶分子并研发了一种蛋白质的比色分析方法。首先，我们合成了一种具有炔基的COFs纳米颗粒，通过一系列表征实验验证了其成功制备。然后，我们利用偶联剂与活化剂将多肽修饰在COFs表面上，成功制备了多肽功能化COFs探针。随后，我们在COFs表面修饰了辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)，HRP的催化活性赋予了COFs探针信号输出和放大的能力，而多肽能够特异性识别并结合靶标蛋白，因此我们所构建的COFs探针能够用于对靶标蛋白的灵敏分析，以富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(Secreted protein acidic and rich in cysteine，SPARC)的定量分析为例，研究表明，我们所提出的方法取得了较好的检测效果，检测限为0.23ng/mL，并且能够应用于复杂样本中SPARC蛋白的检测。

公开(公告)号：CN111307721B

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN201811514485.0

申请日：2018-12-12

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  石榴 ,  贾凤杰 ,  王琳 ,  柴雯鑫 ,  段成杰

IPC: G01N21/19 ,  G01N21/25

Abstract: 本发明公开了一种构建新型离子门控的方法，为离子通道及功能的研究提供了一种模型和方法。通过光照变化切换Azo‑DNA的顺式和反式状态，可以可逆地控制离子门控。在纳米通道‑离子通道复合体的阻挡层上进行修饰后，Azo‑DNA在紫外线照射下呈现为单链状态。在这种情况下，GO可通过π‑π堆积相互作用与单链Azo‑DNA紧密地结合，因此这种纳米结构系统处于“闭合”状态。在被可见光照射后，由于Azo的光响应性，Azo‑DNA变成发夹结构，双链DNA不能稳定地与GO结合，因此切换到“开放”状态。本装置的发现为离子通道的构建，离子功能和离子量的研究提供了模型和方法。此外，这种生物启发的系统具有良好的生物相容性和多样化设计的优势，具有纳米医学，生物传感器和受控药物输送等潜在应用。

公开(公告)号：CN111549104B

公开(公告)日：2022-08-19

申请号：CN202010439342.9

申请日：2020-05-22

Applicant: 南京大学

Inventor： 项阳 ,  焦瑾 ,  李根喜

IPC: C12Q1/682

Abstract: 本发明公开了一种非诊断目的的基于长链DNA支架的DNA纳米带的circRNA的检测方法，包括如下步骤：(1)设计一个环状DNA模板，该模板上含有发夹探针H1和发夹探针H2两种安装位点，以及可以特异性识别靶标BSJ位点的序列片段；(2)以该环状DNA为模板；(3)将发夹探针H1和发夹探针H2通过自组装结合在长链DNA上，所述的发夹探针H2包含荧光基团HEX和猝灭基团BHQ1，(4)最终合成了一种BSJ位点驱动的基于长链DNA支架的DNA纳米带。本发明的DNA纳米带可以特异性的识别目标circRNA，用于复杂生物样品中circRNA的直接分析。

公开(公告)号：CN112557659B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN201910914390.6

申请日：2019-09-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  彭英 ,  吴帅 ,  孙召伟 ,  韩祎巍 ,  潘艳红

IPC: G01N33/574 ,  G01N33/68 ,  G01N21/78 ,  G01N21/31 ,  C12Q1/682

Abstract: 本发明公开了一种可以定量检测粘蛋白1的无酶多重信号放大生物传感器的构建方法和应用。粘蛋白1(MUC1)的定量分析对于癌症预防和早期诊断具有重要作用。本发明基于链置换反应(SDR)和DNA酶循环扩增，构建了一种检测MUC1的高灵敏信号放大策略。MUC1和适体探针(AP)结合启动链置换反应，释放MUC1/AP复合物用于再循环并在双链产物的两端形成DNA酶。该DNA酶可循环切割底物信号探针(SP)，同时释放G‑四链体序列和新的活性DNA酶序列。这种SDR诱导的多重信号放大体系可产生大量G‑四链体序列，在孵育氯化血红素后可产生显着增强的比色信号以提高灵敏度。该方法可有效区分MUC1与其他干扰蛋白，在临床诊断方面具有巨大潜力。

公开(公告)号：CN110470712B

公开(公告)日：2021-10-15

申请号：CN201810453521.0

申请日：2018-05-09

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  木朝丽 ,  石榴 ,  高涛 ,  柴雯鑫 ,  焦瑾

IPC: G01N27/327

Abstract: 本发明公开了一种用于检测miRNA的装置原理、即检测条件、最优条件及其应用，其中原理为：在铂片上面放阳极氧化铝薄膜PAA，PAA膜的上面放一个聚缘垫片防止溶液泄露，垫片上面形成一个圆形的电解池，在电解池中，将铂电极作为对电极，甘汞电极作为参比电极，铂片作为工作电极，形成三电极体系，在PAA孔道中修饰与miRNA互补的ssDNA，靶标的下面部分可以与之互补，再加入事先合成好的含有互补的发夹结构(带有primer)的DNA滚环链c‑DNA，然后加入DNA聚合酶便可实现滚环扩增，形成DNA纳米花，从而使通道的空间位阻减少，而在电解池中的[Fe(CN)6]3‑离子流入工作电极的速率变小，电流减小。根据电流的变化量来表征miRNA的浓度，用来检测肿瘤标注物miR‑21。

公开(公告)号：CN112557659A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN201910914390.6

申请日：2019-09-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  彭英 ,  吴帅 ,  孙召伟 ,  韩祎巍 ,  潘艳红

IPC: G01N33/574 ,  G01N33/68 ,  G01N21/78 ,  G01N21/31 ,  C12Q1/682

Abstract: 本发明公开了一种可以定量检测粘蛋白1的无酶多重信号放大生物传感器的构建方法和应用。粘蛋白1(MUC1)的定量分析对于癌症预防和早期诊断具有重要作用。本发明基于链置换反应(SDR)和DNA酶循环扩增，构建了一种检测MUC1的高灵敏信号放大策略。MUC1和适体探针(AP)结合启动链置换反应，释放MUC1/AP复合物用于再循环并在双链产物的两端形成DNA酶。该DNA酶可循环切割底物信号探针(SP)，同时释放G‑四链体序列和新的活性DNA酶序列。这种SDR诱导的多重信号放大体系可产生大量G‑四链体序列，在孵育氯化血红素后可产生显着增强的比色信号以提高灵敏度。该方法可有效区分MUC1与其他干扰蛋白，在临床诊断方面具有巨大潜力。

公开(公告)号：CN111004837A

公开(公告)日：2020-04-14

申请号：CN201910909652.X

申请日：2019-09-24

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  石海

IPC: C12Q1/6834

Abstract: 本发明公开了一种用于细胞凋亡信号通路有效成像的DNA纳米器件的设计原理、最优条件及其成像应用。虽然许多细胞凋亡信号通路已由经典的分子生物学技术所揭示，但细胞凋亡相关研究仍然迫切需要研发具有可操作性和高效率的技术和方法。为此，我们设计了一种DNA纳米器件，它是通过在金纳米颗粒表面组装一层Y型DNA结构所构建而成。只有包含了上游的锰超氧化物歧化酶信使RNA和下游的细胞色素c的凋亡信号通路作为输入时，DNA纳米器件才能执行“与”逻辑门操作，使Y型DNA从金纳米颗粒表面去组装，输出荧光信号。与靶向单个信号分子的分析方法相比，本发明中的DNA纳米器件同时表征上下游两个相关的信号分子，可以实现对细胞凋亡的信号通路直接的原位分析。