公开(公告)号：CN119662772A

公开(公告)日：2025-03-21

申请号：CN202311218960.0

申请日：2023-09-20

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  韩祎巍 ,  王开智

IPC: C12Q1/42 ,  G01N21/33

Abstract: 本发明中，我们开发了一种灵敏度高、操作简单的细胞膜碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的定量方法。具体而言，我们设计了磷酸基团与胍基相互作用介导的分支肽组装，该组装结构会因ALP催化多肽去磷酸化而被破坏，从而释放出带电荷的多肽，并导致金纳米颗粒的分散程度发生变化、实现比色信号输出。因此，通过这种肽组装的调控可以将细胞膜上ALP的原位识别转化为定量信号，并且无需逐步的标记以及蛋白质的分离纯化。同时，利用具有分支结构的多肽对信号进行放大，使得本方法具有较高的灵敏度。结果表明，本方法具备对HepG2细胞膜上低至34 pg/cell ALP进行定量测定的能力，并且，通过量化细胞膜ALP的表达水平，本方法能够对6种不同细胞系进行区分。

公开(公告)号：CN117871858A

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202210880905.7

申请日：2022-07-25

Applicant: 南京大学

Inventor： 李根喜 ,  鲁健杨 ,  韩祎巍 ,  张怡晨 ,  王开智

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/543 ,  G01N21/78

Abstract: 在本发明中，我们制备了多肽功能化修饰的COFs，并且用其负载酶分子并研发了一种蛋白质的比色分析方法。首先，我们合成了一种具有炔基的COFs纳米颗粒，通过一系列表征实验验证了其成功制备。然后，我们利用偶联剂与活化剂将多肽修饰在COFs表面上，成功制备了多肽功能化COFs探针。随后，我们在COFs表面修饰了辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)，HRP的催化活性赋予了COFs探针信号输出和放大的能力，而多肽能够特异性识别并结合靶标蛋白，因此我们所构建的COFs探针能够用于对靶标蛋白的灵敏分析，以富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(Secreted protein acidic and rich in cysteine，SPARC)的定量分析为例，研究表明，我们所提出的方法取得了较好的检测效果，检测限为0.23ng/mL，并且能够应用于复杂样本中SPARC蛋白的检测。