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公开(公告)号：CN112159799A
公开(公告)日：2021-01-01
申请号：CN202010499879.4
申请日：2020-06-04
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种基因VII型NDV突变型感染性克隆重组病毒DHN3‑mF，其序列如序列表SEQ ID NO：1所示。该病毒经过对F蛋白所对应的序列进行基因突变，使之毒性降低，但是同时保证动物产生强烈的保护性免疫反应。同时，本发明还提供了该病毒的制备方法以及基于该病毒制备的疫苗。
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公开(公告)号：CN110592108A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201910894754.9
申请日：2019-09-20
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的感染性重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK-21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；NP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1-1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925-3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166-15192nt。该方法可以成功的克隆出于原病毒株完全相同、无突变的重组病毒。
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公开(公告)号：CN109295009A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811172273.9
申请日：2018-10-09
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞系的复苏与传代培养。步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞系接种鸡传染性法氏囊病病毒，实现病毒大规模培养。步骤3：接毒后，每隔12h取样测定病毒的TCID50，在病毒TCID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸡传染性法氏囊病病毒。本发明的全悬浮培养方法提高了病毒培养规模和效率，符合未来疫苗生产的趋势，有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。
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公开(公告)号：CN110592108B
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN201910894754.9
申请日：2019-09-20
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK‑21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；NP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1‑1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925‑3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166‑15192nt。该方法可以成功的克隆出于原病毒株完全相同、无突变的重组病毒。
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公开(公告)号：CN110317830A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910315101.0
申请日：2019-04-18
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N15/85 , A61K39/235 , A61P31/20
Abstract: 本发明一种鸭腺病毒2型DNA疫苗及其制备方法和应用，属于免疫学技术领域。所述制备方法包括：合成如SEQ ID NO.3所示的DAV-hexon序列；构建pcDNA3.1-DAV-hexon质粒；pcDNA3.1-DAV-hexon质粒转染293T细胞，在293T细胞中表达得到hexon蛋白即鸭腺病毒2型DNA疫苗。所述鸭腺病毒2型DNA疫苗由上述制备方法制得。所述鸭腺病毒2型DNA疫苗在制备预防鸭腺病毒2型疫病疫苗中的应用。本发明具有以下优点：SEQ ID NO.3所示的DAV-hexon序列有利于抗原蛋白的表达；更能提高hexon的表达量；可对番鸭提供80％-90％的攻毒保护。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110317778A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910551879.1
申请日：2019-06-25
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N5/0735 , C12N5/02
Abstract: 本发明属于培养基领域，具体为一种EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，添加剂A中各物质在所述培养基中浓度为：胰岛素1-10mg/L；IGF-1 5-10μg/L；腐胺0.5-2mg；谷胱甘肽0.5-5mg/L；乙醇胺1-5mg/L；β-巯基乙醇10-50μM；卵磷脂1-5mg/L；维生素C 10-50mg/L；牛磺酸50-100mg/L；胆固醇2-5mg/L；谷氨酰胺3-6mM；每1L培养基中所述氨基酸混合组分添加量为1000mg-3000mg。该培养基支持EB66细胞在无血清、全悬浮的条件下快速增殖，倍增时间短。细胞呈现较高密度，同时，本发明还提供该培养基的制备方法。
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公开(公告)号：CN110283846A
公开(公告)日：2019-09-27
申请号：CN201910314515.1
申请日：2019-04-18
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N15/85 , C07K14/075 , A61K39/235 , A61P31/20
Abstract: 本发明一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白及其制备方法和应用，属于免疫学领域。所述制备方法，包括下述步骤：化学合成SEQ ID NO.1所示五邻体基因序列；制备重组pFastBac-1-penton载体；用制备的重组pFastBac-1-penton载体转染sf9细胞，在sf9细胞表达得到重组蛋白；对得到的重组蛋白经Ni-NTA纯化后得到纯化的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白。所述血清4型禽腺病毒五邻体蛋白由上述制备方法制得。所述的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白在制备预防禽腺病毒疫苗中的应用。本发明具有以下优点：基因合成无需模板，更经济、简便；更能提高penton的表达量；易于工业化规模生产。
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公开(公告)号：CN109207439A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811172272.4
申请日：2018-10-09
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种鸭瘟病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞系的复苏与传代培养。步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞系接种鸭瘟病毒，实现病毒大规模培养。步骤3：接毒后，每隔12h取样测定病毒的TCID50，在病毒TCID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸭瘟病毒。本发明的全悬浮培养方法提高了病毒培养规模和效率，符合未来疫苗生产的趋势，有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。
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公开(公告)号：CN108261543A
公开(公告)日：2018-07-10
申请号：CN201810128488.4
申请日：2018-02-08
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC: A61K39/17 , A61K39/215 , A61K39/145 , C12N7/00 , A61P31/14 , A61P31/16 , C12R1/09
CPC classification number: A61K39/12 , A61K2039/5252 , A61K2039/70 , C12N7/00 , C12N2760/16134 , C12N2760/16152 , C12N2760/18134 , C12N2760/18152 , C12N2770/20034 , C12N2770/20052
Abstract: 本发明提供了一种传代细胞源鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备方法及其应用，包括步骤如下：取EB66细胞于生物反应器中进行生长培养，用于病毒接种；采用二阶培养法，向EB66细胞接种新城疫病毒、传染性支气管炎病毒或禽流感病毒；在接毒24h后，病毒EID50达到最高时收获病毒并保存，得到病毒液；重复上述步骤以分别获得新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液并灭活；将灭活后的新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液混合，制备灭活疫苗。本发明采用EB66传代细胞系进行鸡新城疫病毒、传染性支气管炎和禽流感病毒的培养，避免了使用鸡胚造成胚体异源蛋白和外源病毒污染的风险，提高病毒的生产品质，简化病毒的生产工艺。
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公开(公告)号：CN108159412A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201810030757.3
申请日：2018-01-12
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
CPC classification number: A61K39/12 , A61K39/39 , A61K2039/5252 , A61K2039/55511 , A61K2039/70 , C12N7/00 , C12N2760/16151 , C12N2760/18151
Abstract: 本发明公开一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品，该方法包括以下步骤：用EB66传代细胞分别接种鸡新城疫、禽流感病毒株，在病毒EID50效价达到最高时收获病毒并保存；分别灭活鸡新城疫和禽流感病毒；将灭活后的鸡新城疫和禽流感病毒在吐温‑80中完全混合，得到病毒混合液；在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化配制成二联疫苗。本发明通过采用鸭胚胎干细胞EB66传代细胞系分别进行鸡新城疫和禽流感病毒的培养，然后制备成的二联疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。
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