公开(公告)号：CN110129315A

公开(公告)日：2019-08-16

申请号：CN201910460240.2

申请日：2019-05-30

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  陈思秀 ,  刘玟妍 ,  艾金霞 ,  李明成 ,  赵云冬 ,  王艳双 ,  高丽君 ,  王雪松 ,  段思琪 ,  李盈诺 ,  王天添

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种从阿胶中快速提取DNA的优化方法。本方法使用DNA纯化柱代替酚、氯仿等有毒的有机溶剂，并经过数次优化，确定了提取阿胶中驴源性基因组DNA的最适条件，有效去除阿胶中的蛋白质成分，最高效率的从深加工的阿胶及阿胶制品中提取出严重降解的DNA。本方法所需试剂安全无毒害，操作简单、省时，可在90min内完成阿胶基因组DNA提取，经聚合酶链式反应、2％琼脂糖凝胶电泳后在78bp处出现特异性条带，克隆测序比对后，与GenBank中已登记的驴物种相似性为100％。本方法提取的DNA纯度高、浓度大，解决了阿胶及阿胶制品DNA难以提取的问题，为分子生物学鉴定提供了关键的技术支持。

公开(公告)号：CN116287350A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310430461.1

申请日：2023-04-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 赵云冬 ,  孙丽媛 ,  姜菲菲 ,  潘蓓珍 ,  刘岩 ,  宿建胜 ,  杨继飞 ,  王岳峰

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术联合免疫学技术快速鉴定鲍曼不动杆菌耐苯唑西林β‑内酰胺酶（OXA）基因的胶体金免疫层析试纸条。其特点是，它包含：PCR反应体系和胶体金试纸条反应体系。基于鲍曼不动杆菌OXA基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对鲍曼不动杆菌OXA基因片段进行分析，设计鲍曼不动杆菌OXA特异性引物。在上游引物（F）5'用FITC进行标记，下游引物（R）5'用生物素进行标记；普通PCR扩增后产物5'端修饰的生物素首先与金标垫上修饰有链霉素抗生物素蛋白的胶体金结合，检测线上的抗荧光素抗体将一端修饰有荧光素的扩增产物捕获，产生红色的条带；质控线上的生物素捕获胶体金，使质控线同样显色。在保证质控线为阳性的提前下，通过检测线是否出现颜色反应确定是否为耐OXA鲍曼不动杆菌感染，据此建立PCR‑胶体金免疫层析试纸条技术，对鲍曼不动杆菌耐药情况进行快速、可靠的鉴定。

公开(公告)号：CN108456736A

公开(公告)日：2018-08-28

申请号：CN201810446159.4

申请日：2018-05-11

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  李明成 ,  艾金霞 ,  赵云冬 ,  王艳双 ,  王雪松 ,  高丽君

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及中药检测技术领域，是一种牛脊髓DNA鉴定试剂盒，其特征是由样本前处理液、线粒体DNA提取体系、PCR反应体系三部分体系组成。PCR反应体系总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL。一种牛脊髓DNA鉴定方法是设计牛脊髓特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：PCR扩增结果出现254bp条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，鉴定方法能够准确鉴定牛脊髓真伪。

公开(公告)号：CN116004858A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202111231370.2

申请日：2021-10-22

Applicant: 北华大学

Inventor： 赵云冬 ,  王丹 ,  赵潇颖 ,  贾慧建 ,  宋顺佳 ,  姜菲菲 ,  邵学超 ,  赵远

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术快速鉴定大肠埃希菌和泛菌DNA的试剂盒。其特点是，它包含：PCR反应体系和酶切反应体系。PCR反应体系：总体系为25μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，待检DNA模板(10ng/μL)1μL，引物F、R(2.5ng/μL)各0.4μL，余为双蒸馏水。酶切反应体系：总体系20μL，取上述PCR产物10μL于EP管中，加入Hind III酶1μL，10×M Buffer 2μL，余为双蒸馏水。本发明是基于细菌16S rDNA基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对大肠埃希菌和泛菌16S rDNA基因片段进行分析，发现二者具有较高的同源性，普通PCR难以鉴别。在大肠埃希菌在16S rDNA基因片段中存在一个酶切位点，而泛菌不存在此位点，据此建立PCR‑酶切技术，对大肠埃希菌进行快速、可靠的鉴定。

公开(公告)号：CN110358843A

公开(公告)日：2019-10-22

申请号：CN201910686384.X

申请日：2019-07-29

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  王天添 ,  陈思秀 ,  刘玟妍 ,  关奕泽 ,  艾金霞 ,  李明成 ,  赵云冬 ,  王艳双 ,  高丽君 ,  王雪松

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明涉及肉类检测技术领域，是一种狗源性DNA检测试剂盒，其特征是由样本前处理液、线粒体DNA提取体系、PCR反应体系三部分体系组成。PCR反应体系总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM狗肉引物2μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水7μL。一种狗源性DNA鉴定方法是设计狗肉特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：PCR扩增结果出现481bp条带为正品狗肉，出现多条或不出现均为伪品狗肉，出现393bp条带为伪品狐肉，出现289bp条带为伪品貂肉，参照图1、图2。鉴定方法能够准确鉴定狗肉真伪。