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公开(公告)号：CN111334529A
公开(公告)日：2020-06-26
申请号：CN202010426973.7
申请日：2020-05-20
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种利用第三代碱基编辑器制备精准BLG基因敲除牛的方法。本发明保护基因敲除奶牛的制备方法，包括如下步骤：将出发奶牛基因组中BLG基因自5’端第277位碱基由C突变为T；所述BLG基因为SEQ ID No.1所示的DNA分子。本发明建立了一种大动物点突变技术，可以进行精确的单碱基突变，通过巧妙设计C-T的突变，造成终止密码子从而进行蛋白翻译提前终止达到基因敲除的目的。该方法模拟自然突变动物，同时与传统基因编辑技术相比，基于BE3的点突变技术并不产生基因组双链断裂,因而极大地避免了随机突变乃至基因组损害，因此更具有安全性。本发明为牛的精确基因编辑及基因敲除研究提供重要技术支持。
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公开(公告)号：CN104450673B
公开(公告)日：2017-07-21
申请号：CN201410646037.1
申请日：2014-11-14
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/09 , C12N15/11 , C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： A01K67/027 , C12N15/09 , C12N15/11 , C12N15/877
摘要： 本发明公开了一种Y染色体修饰方法及其应用。本发明公开一种动物Y染色体修饰方法，是利用TALEN方法对离体的动物体细胞的Y染色体进行特异性的自杀元件修饰。本发明为选择性培育特定性别的动物、提高育种效率奠定基础。
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公开(公告)号：CN111808887B
公开(公告)日：2020-12-18
申请号：CN202010943761.6
申请日：2020-09-10
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/90 , C12N15/877 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/12 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种制备与自然突变比利时蓝牛类似的双肌臀肉牛的方法。本发明提供了一种制备MSTN双等位基因突变细胞的方法，为对牛离体成纤维细胞基因组的MSTN基因双等位基因的第一外显子的靶点区域均进行基因组编辑，使外显子1提前形成终止密码子而终止表达，得到MSTN双等位基因突变细胞；本发明建立了一种制备无任何外源DNA整合的双MSTN等位基因小片段缺失的（MSTN‑4/‑4）敲除牛，重要的这种牛与自然存在的比利时蓝牛牛有非常相似的双肌臀表型。
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公开(公告)号：CN111454962B
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010556489.6
申请日：2020-06-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/12 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了基于牛安全位点的定点修饰及其应用。本发明提供了的牛特异性整合位点BSIL1，为如下1）‑3）中任一所述的DNA分子：1）序列1所示的DNA分子；2）在严格条件下与1）所限定的DNA分子杂交且具有相同功能的DNA分子；3）与1）所限定的DNA分子至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。本发明选择常用的三种广谱性启动子EF1a、CAG、PGK作为EGFP的外源启动子，一起整合到BSIL1位点，发现BSIL1位点可以支持不同启动子启动外源基因的安全、高效、稳定表达。
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公开(公告)号：CN104593376A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201410854498.8
申请日：2014-12-31
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/16 , C07K14/59 , C12N15/85 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过构建二花脸猪基因组BAC文库，获得猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα全基因序列，并构建BAC真核表达载体，利用本发明所提供的方法构建的转基因猪可以进一步应用于与猪生殖及其产仔数的功能相关的研究，提高饲养动物产仔数。
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公开(公告)号：CN103992409A
公开(公告)日：2014-08-20
申请号：CN201410158270.5
申请日：2014-04-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/70 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及基因工程，具体公开了一种用于剔除标记基因的CPP5-Cre融合蛋白及其应用，所述CPP5-Cre融合蛋白包括短的5氨基酸细胞穿膜肽CPP5（KLPVM）和位点特异重组酶Cre蛋白。利用表达纯化后的CPP5-Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞孵育后，获得筛选标记基因剔除的阳性克隆后进行体细胞克隆，获得F0代的筛选标记基因剔除的转基因猪。
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公开(公告)号：CN111454962A
公开(公告)日：2020-07-28
申请号：CN202010556489.6
申请日：2020-06-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/12 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了基于牛安全位点的定点修饰及其应用。本发明提供了的牛特异性整合位点BSIL1，为如下1）-3）中任一所述的DNA分子：1）序列1所示的DNA分子；2）在严格条件下与1）所限定的DNA分子杂交且具有相同功能的DNA分子；3）与1）所限定的DNA分子至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。本发明选择常用的三种广谱性启动子EF1a、CAG、PGK作为EGFP的外源启动子，一起整合到BSIL1位点，发现BSIL1位点可以支持不同启动子启动外源基因的安全、高效、稳定表达。
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公开(公告)号：CN109321600A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811219908.6
申请日：2018-10-19
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/873 , A01K67/027 , C12Q1/6888
摘要： 本发明公开了一种培育生产低致敏性牛奶的牛的方法及其应用。该方法包括如下步骤：向牛成纤维细胞导入锌指核酸酶载体pZFN，得到基因型为双等位基因突变型的供体细胞；双等位基因突变型为牛的两条同源染色体上的β-LG基因的核苷酸分子均发生移码突变；将供体细胞的细胞核移入除去细胞核的牛卵母细胞，发育形成重构胚胎，然后移入母牛子宫，分娩获得生产低致敏性牛奶的牛。本发明成功培育了无外源DNA整合、可产生无β-乳球蛋白牛奶和通过正常育种将突变传递给下一代的β-LG双等位基因敲除牛。本发明为解决牛奶过敏问题打下重要基础，同时也将为人源化牛奶的制备提供无限可能。本发明具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN104450673A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410646037.1
申请日：2014-11-14
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/09 , C12N15/11 , C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： A01K67/027 , C12N15/09 , C12N15/11 , C12N15/877
摘要： 本发明公开了一种Y染色体修饰方法及其应用。本发明公开一种动物Y染色体修饰方法，是利用TALEN方法对离体的动物体细胞的Y染色体进行特异性的自杀元件修饰。本发明为选择性培育特定性别的动物、提高育种效率奠定基础。
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公开(公告)号：CN111334529B
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN202010426973.7
申请日：2020-05-20
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种利用第三代碱基编辑器制备精准BLG基因敲除牛的方法。本发明保护基因敲除奶牛的制备方法，包括如下步骤：将出发奶牛基因组中BLG基因自5’端第277位碱基由C突变为T；所述BLG基因为SEQ ID No.1所示的DNA分子。本发明建立了一种大动物点突变技术，可以进行精确的单碱基突变，通过巧妙设计C‑T的突变，造成终止密码子从而进行蛋白翻译提前终止达到基因敲除的目的。该方法模拟自然突变动物，同时与传统基因编辑技术相比，基于BE3的点突变技术并不产生基因组双链断裂,因而极大地避免了随机突变乃至基因组损害，因此更具有安全性。本发明为牛的精确基因编辑及基因敲除研究提供重要技术支持。
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