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公开(公告)号：CN104419719B
公开(公告)日：2017-08-25
申请号：CN201310392856.3
申请日：2013-09-02
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , A61D19/00 , A01K67/027 , C12Q1/68
摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。
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公开(公告)号：CN103992409B
公开(公告)日：2017-08-25
申请号：CN201410158270.5
申请日：2014-04-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/70 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及基因工程，具体公开了一种用于剔除标记基因的CPP5‑Cre融合蛋白及其应用，所述CPP5‑Cre融合蛋白包括短的5氨基酸细胞穿膜肽CPP5（KLPVM）和位点特异重组酶Cre蛋白。利用表达纯化后的CPP5‑Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞孵育后，获得筛选标记基因剔除的阳性克隆后进行体细胞克隆，获得F0代的筛选标记基因剔除的转基因猪。
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公开(公告)号：CN104593376A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201410854498.8
申请日：2014-12-31
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/16 , C07K14/59 , C12N15/85 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过构建二花脸猪基因组BAC文库，获得猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα全基因序列，并构建BAC真核表达载体，利用本发明所提供的方法构建的转基因猪可以进一步应用于与猪生殖及其产仔数的功能相关的研究，提高饲养动物产仔数。
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公开(公告)号：CN103992409A
公开(公告)日：2014-08-20
申请号：CN201410158270.5
申请日：2014-04-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/70 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及基因工程，具体公开了一种用于剔除标记基因的CPP5-Cre融合蛋白及其应用，所述CPP5-Cre融合蛋白包括短的5氨基酸细胞穿膜肽CPP5（KLPVM）和位点特异重组酶Cre蛋白。利用表达纯化后的CPP5-Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞孵育后，获得筛选标记基因剔除的阳性克隆后进行体细胞克隆，获得F0代的筛选标记基因剔除的转基因猪。
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公开(公告)号：CN103993027B
公开(公告)日：2017-09-26
申请号：CN201410157596.6
申请日：2014-04-17
申请人： 中国农业大学 , 北京济福霖生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/63 , C12N15/873 , C12N5/073 , A01K67/027
摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，具体为：1）构建自我剪切元件TmOCN；2）构建带有自我剪切元件的打靶载体；3）筛选阳性克隆细胞；4）体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪。其中剪切元件TmOCN中：TmO代表精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子；C代表Cre重组酶基因；N代表转基因动物常用的neo筛选标记基因。所述自我剪切元件TmOCN在SCNT过程中的猪早期胚胎发育阶段特异启动Cre酶进行自我剪切，达到在F0代自动敲除标记基因的目的。
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公开(公告)号：CN104593377A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201410856926.0
申请日：2014-12-31
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/16 , C12N15/10 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种猪促卵胞激素β-亚基的编码基因FSHβ，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过构建二花脸猪基因组BAC文库，获得猪促卵胞激素β-亚基的编码基因FSHβ全基因序列，并构建BAC真核表达载体，利用本发明所提供的方法构建的转基因猪可以进一步应用于与猪生殖及其产仔数的功能相关的研究，提高饲养动物产仔数。
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公开(公告)号：CN104419719A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310392856.3
申请日：2013-09-02
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , A61D19/00 , A01K67/027 , C12Q1/68
摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。
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公开(公告)号：CN103993027A
公开(公告)日：2014-08-20
申请号：CN201410157596.6
申请日：2014-04-17
申请人： 中国农业大学 , 北京济福霖生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/63 , C12N15/873 , C12N5/073 , A01K67/027
摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，具体为：1）构建自我剪切元件TmOCN；2）构建带有自我剪切元件的打靶载体；3）筛选阳性克隆细胞；4）体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪。其中剪切元件TmOCN中：TmO代表精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子；C代表Cre重组酶基因；N代表转基因动物常用的neo筛选标记基因。所述自我剪切元件TmOCN在SCNT过程中的猪早期胚胎发育阶段特异启动Cre酶进行自我剪切，达到在F0代自动敲除标记基因的目的。
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