公开(公告)号：CN103992409A

公开(公告)日：2014-08-20

申请号：CN201410158270.5

申请日：2014-04-18

申请人： 中国农业大学

发明人： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  李秋艳 ,  赵蕊 ,  孙永川

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/873 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及基因工程，具体公开了一种用于剔除标记基因的CPP5-Cre融合蛋白及其应用，所述CPP5-Cre融合蛋白包括短的5氨基酸细胞穿膜肽CPP5（KLPVM）和位点特异重组酶Cre蛋白。利用表达纯化后的CPP5-Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞孵育后，获得筛选标记基因剔除的阳性克隆后进行体细胞克隆，获得F0代的筛选标记基因剔除的转基因猪。

公开(公告)号：CN104419719B

公开(公告)日：2017-08-25

申请号：CN201310392856.3

申请日：2013-09-02

申请人： 中国农业大学

发明人： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  吴森 ,  李秋艳 ,  温啸 ,  赵蕊

IPC分类号： C12N15/85 ,  A61D19/00 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/68

摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。

公开(公告)号：CN103992409B

公开(公告)日：2017-08-25

申请号：CN201410158270.5

申请日：2014-04-18

申请人： 中国农业大学

发明人： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  李秋艳 ,  赵蕊 ,  孙永川

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/873 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及基因工程，具体公开了一种用于剔除标记基因的CPP5‑Cre融合蛋白及其应用，所述CPP5‑Cre融合蛋白包括短的5氨基酸细胞穿膜肽CPP5（KLPVM）和位点特异重组酶Cre蛋白。利用表达纯化后的CPP5‑Cre融合蛋白与带有筛选标记基因的猪成纤维细胞孵育后，获得筛选标记基因剔除的阳性克隆后进行体细胞克隆，获得F0代的筛选标记基因剔除的转基因猪。

公开(公告)号：CN103993027B

公开(公告)日：2017-09-26

申请号：CN201410157596.6

申请日：2014-04-17

申请人： 中国农业大学 ,  北京济福霖生物技术有限公司

发明人： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  李秋燕 ,  赵蕊

IPC分类号： C12N15/63 ,  C12N15/873 ,  C12N5/073 ,  A01K67/027

摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，具体为：1）构建自我剪切元件TmOCN；2）构建带有自我剪切元件的打靶载体；3）筛选阳性克隆细胞；4）体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪。其中剪切元件TmOCN中：TmO代表精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子；C代表Cre重组酶基因；N代表转基因动物常用的neo筛选标记基因。所述自我剪切元件TmOCN在SCNT过程中的猪早期胚胎发育阶段特异启动Cre酶进行自我剪切，达到在F0代自动敲除标记基因的目的。

公开(公告)号：CN104419719A

公开(公告)日：2015-03-18

申请号：CN201310392856.3

申请日：2013-09-02

申请人： 中国农业大学

发明人： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  吴森 ,  李秋艳 ,  温啸 ,  赵蕊

IPC分类号： C12N15/85 ,  A61D19/00 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/68

摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。

公开(公告)号：CN103993027A

公开(公告)日：2014-08-20

申请号：CN201410157596.6

申请日：2014-04-17

申请人： 中国农业大学 ,  北京济福霖生物技术有限公司

发明人： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  李秋燕 ,  赵蕊

IPC分类号： C12N15/63 ,  C12N15/873 ,  C12N5/073 ,  A01K67/027

摘要： 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，具体为：1）构建自我剪切元件TmOCN；2）构建带有自我剪切元件的打靶载体；3）筛选阳性克隆细胞；4）体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪。其中剪切元件TmOCN中：TmO代表精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子；C代表Cre重组酶基因；N代表转基因动物常用的neo筛选标记基因。所述自我剪切元件TmOCN在SCNT过程中的猪早期胚胎发育阶段特异启动Cre酶进行自我剪切，达到在F0代自动敲除标记基因的目的。